高效液相色谱法测定郁李仁中苦杏仁苷的含量

　　2.4  线性关系考察

    精密量取苦杏仁苷对照品溶液1 mL置10 mL量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度,再依次稀释,制得含苦杏仁苷211.6、105.8、52.9、26.45、13.225、6.612 5、3.306 25 μg/mL的对照品溶液。分别精密吸取各20 μL进样测定,以峰面积积分值对浓度进行回归分析,得苦杏仁苷回归方程为：Y＝22 645X＋10 860,r＝1.000 0；苦杏仁苷线性范围为0.066 13～4.232 μg。

　　2.5  精密度试验

    精密吸取同一供试品溶液重复进样6次,测得苦杏仁苷峰面积积分值的RSD＝0.86%。

　　2.6  重复性试验

    取同一批次样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按照“2.1”项下色谱条件测定,结果苦杏仁苷的平均含量为3.16%,RSD＝1.35%。

　　2.7  稳定性试验

    取同一供试品溶液于配制后0、2、4、6、8、10、24 h测定,计算峰面积RSD＝1.11%,表明供试品溶液在24 h内稳定。

　　2.8  加样回收率试验

    精密称取已知含量的同一批次(批号080121)郁李仁粉末6份,每份约0.15 g,脱脂后分别精密加入4.232 mg/mL的苦杏仁苷对照品溶液1 mL,依法制备供试品溶液并测定。结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）
 
　　2.9  样品含量测定

    分别测定了小李仁、大李仁药材各3批,采用外标法计算苦杏仁苷的含量,结果符合要求。表2  样品中苦杏仁苷含量测定结果(略)

　　3  讨论

    本研究试验了多种流动相比例和流速[2-6],采用甲醇-水(20∶80)作为流动相,苦杏仁苷峰能较好分离,且出峰时间适当；水相中加入缓冲盐或酸对测定结果无明显影响,故水相选择纯水；色谱柱柱温设定25、35、40 ℃对分析结果无明显影响,故柱温设为25 ℃。
   
　　由于郁李仁中含有大量的油脂,如不除去测定时易引起干扰,且连续测定含油脂样品还可能引起色谱柱柱效降低,故提取前应先脱脂；文献报道[7]和本次试验结果均表明石油醚脱脂效果优于乙醚,故选择石油醚作为脱脂溶剂。苦杏仁苷易被苦杏仁苷酶水解,故一般测定时采用甲醇为提取溶剂,但甲醇提取液直接进行测定时,苦杏仁苷峰前拖尾现象严重,改用70%甲醇为提取溶剂时,峰形有很大改善,理论塔板数增加近1倍。比较了不同时间回流和超声提取效果,结果回流1 h可将苦杏仁苷提取完全,效果优于超声提取。

    2005年版《中华人民共和国药典》在郁李仁含量测定项下采用的是银量法,其原理是用硝酸银滴定苦杏仁苷水解产生的氢氰酸来计算含量,苦杏仁苷的水解程度对结果影响较大,且在判断滴定终点时不同操作人员之间存在较大误差；采用HPLC法可直接测定药材中苦杏仁苷含量,结果客观准确,方法可靠。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.144.

　　[2] 王友兰,李红兵,华玉琴.HPLC法测定桃仁中苦杏仁苷的含量[J].中国药师,2002,5(9)：550,556.

　　[3] 甄 攀,王德宝,贾天军,等.郁李仁中苦杏仁甙的HPLC分析[J].张家口医学院学报,2002,19(5)：13－14.

　　[4] 袁 丹,胡 爽,毕开顺,等.桃仁药材质量评价法的研究[J].中国药学杂志,2003,38(1)：53－56.

　　[5] 吴 迪,王建中,赵云霞,等.苦杏仁苷几种测定方法的比较研究[J].食品工业科技,2006,27(2)：184－185,189.

　　[6] 王乾蕾,李运景,余 健,等.高效液相色谱法测定清肺合剂中苦杏仁苷含量[J].中国药业,2008,17(19)：31－32.

　　[7] 闾肖波,苏宝根,杨亦文.纯苦杏仁苷的制备[J].中国医药工业杂志, 2006,37(3)：165－167.