高效液相色谱法测定郁李仁中苦杏仁苷的含量

                     作者：钱平,贾云,刘志辉,钱芳 

【摘要】  目的 建立高效液相色谱法测定郁李仁中苦杏仁苷含量的方法。方法 色谱柱：Supelco ODS C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(20∶80)；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm。结果 苦杏仁苷峰分离良好,苦杏仁苷浓度在0.066 13～4.232 μg间线性关系良好,r＝1.000 0,平均回收率为95.91%(RSD＝2.29%)。结论 本方法准确、可靠,可用于郁李仁中苦杏仁苷的含量测定。

【关键词】  郁李仁；苦杏仁苷；高效液相色谱法；含量测定

    Abstract：Objective To establish a HPLC method for the determination of amygdalin in Semen Pruni. Methods The analytical column was Supelco ODS C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm), with methanol-water (20∶80) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min, and the detection wavelength was 210 nm. Results The linear range for amygdalin was 0.066 13～4.232 μg (r＝1.000 0). The average recovery was 95.91% (RSD＝2.29%). Conclusion The method is accurate and reliable, and can be used in the determination of amygdalin in Semen Pruni.

    Key words：Semen Pruni；amygdalin；HPLC；content determination
 
    郁李仁为蔷薇科植物欧李Prunus humilis Bge.、郁李 Prunus japonica Thunb.或长柄扁桃Prunus pedunculata Maxim.的干燥成熟种子,前二者习称“小李仁”,后者习称“大李仁”,具有润燥滑肠、下气、利水的功效[1]。苦杏仁苷为郁李仁的主要成分之一,2005年版《中华人民共和国药典》在该药材含量测定项下采用银量法测定,但银量法属于间接测定方法,影响因素多,而目前采用其他方法对郁李仁进行含量测定的报道较少。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法直接测定郁李仁中苦杏仁苷的含量,方法准确、可靠,为郁李仁中苦杏仁苷的含量测定提供了依据和参考。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器

　　Waters 515泵高效液相色谱仪,Waters 2487紫外检测器,ZW色谱柱,恒温箱(中国科学院大连化物所),Empower色谱工作站,Agilent手动进样器(20 μL)；十万分之一电子分析天平(BP- 211D型,德国Sartorius)；Cary50紫外分光光度计(美国瓦里安)。

　　1.2  试药

　　苦杏仁苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110820- 200403)；郁李仁药材购自安徽亳州药材市场,经鉴定分别为蔷薇科植物郁李和长柄扁桃的干燥成熟种子。乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　色谱柱：Supelco ODS C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(20∶80)；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm,进样量：20 μL。色谱图见图1。

　　2.2  对照品溶液的制备

    精密称取经五氧化二磷减压干燥12 h的苦杏仁苷对照品42.32 mg,置10 mL量瓶中,用70%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得苦杏仁苷4.232 mg/mL的对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备

    取郁李仁粗粉0.3 g,精密称定,置具塞三角烧瓶中,加石油醚(60～90 ℃)50 mL,回流提取1 h,过滤,以石油醚分3次洗涤滤渣及容器,每次10 mL,弃去石油醚液,滤纸及滤渣挥干溶剂,置原容器中,精密加入70%甲醇溶液50 mL,精密称定,回流提取1 h,放冷至室温,再称重,用70%甲醇补足失重,抽滤,精密量取续滤液5 mL置10 mL量瓶中,以70%甲醇稀释至刻度,以0.45 μm滤膜滤过,取续滤液即得。