HPLC法测定犀羚解毒丸中甘草酸的含量

　　2.3  线性关系考察

    分别精密吸取25 μg/mL甘草酸铵对照品溶液3、5、8、10、13、15 μL。在上述色谱条件下,分别注入液相色谱仪测定。以甘草酸铵的进样量(μg)分别对相应峰面积积分值进行线性回归,得回归方程：Y＝788 206X－8 096.4(r＝0.999 6)。结果表明,对照品进样量在0.075～0.375 μg范围内,甘草酸铵峰面积与进样量呈现良好的线性关系。

　　2.4  空白试验
   
　　分别吸取甘草酸铵对照品溶液、犀羚解毒丸供试品溶液及缺甘草的阴性对照溶液10 μL,注入液相色谱仪,按上述方法分别测定,得到相应的色谱图(见图1)。结果表明：犀羚解毒丸供试品溶液的色谱图在与甘草酸铵对照品相应保留时间处出现甘草酸的色谱峰；而缺甘草的阴性对照溶液色谱图在相同保留时间处没有出现上述色谱峰,说明制剂中其他成分对甘草酸的测定不产生干扰。

　　2.5  精密度试验

    分别精密吸取25 μg/mL甘草酸铵对照品溶液各10 μL,重复进样6次,结果甘草酸铵峰面积的RSD＝1.86%,表明精密度较好。

　　2.6  稳定性试验

    取同一供试品溶液(批号6013957),分别于0、2、4、6、8、12 h进样测定,结果甘草酸铵峰面积的RSD＝1.76%,表明犀羚解毒丸供试品溶液在12 h内稳定性良好。

　　2.7  重复性试验

    精密称取同一批犀羚解毒丸(批号6013957),按“2.2.2”项下方法制备供试液共6份,并在上述色谱条件下进行测定。结果样品中甘草酸的平均含量为2.37 mg/丸,RSD＝1.16%,表明重复性较好。

　　2.8  加样回收率试验
   
　　取犀羚解毒丸(批号6013957,2.40 mg/丸)适量,与硅藻土按6∶4比例粉碎并均匀混合成中粉,精密称取4.0 g上述粉末共6份,分别置250 mL的具塞锥形瓶中,精密加入甘草酸铵对照品1.25 mg,精密加入40%甲醇100 mL,称定重量,超声30 min,放冷,再称定重量,用40%甲醇补足减失的重量,摇匀,静置,离心,取上清液滤过,取续滤液,进行回收率测定,计算加样回收率,结果见表1。结果表明,按本法测定样品中甘草酸的含量,加样回收率均符合要求。表1  甘草酸的加样回收率试验结果 （略）

　　2.9  样品测定

    精密称取3批不同批号犀羚解毒丸制剂,每批平行测定3份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,并在上述色谱条件下测定,计算样品中甘草酸的含量,结果见表2。表2  甘草酸含量测定结果(略)

　　3  讨论

    本试验考察了超声处理不同时间、加入不同体积提取溶剂的样品中甘草酸的含量,结果表明超声提取30 min、溶剂量为100 mL可提取完全。取甘草酸铵对照品溶液适量,经紫外光谱扫描,其最大吸收波长为250 nm,因而选择检测波长为250 nm。
    　
　　根据文献报道[2-6],并经预试验,对药典中流动相进行了优选,确定甲醇-[0.2 mol/L醋酸铵∶冰醋酸(33∶1)](64∶36)为流动相,色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),所得色谱图的分离度好,保留时间较合适。故本试验选用的流动相为甲醇-[0.2 mol/L醋酸铵-冰醋酸(33∶1)](64∶36),并将该条件的色谱图记录下来,以被测组分甘草酸峰计算理论塔板数,并计算甘草酸与相邻峰的分离度。根据试验结果,考虑到仪器、色谱柱、流动相的配制和温度等系统因素的影响,规定理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于2 000。

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.59.

　　[2] 白 丽,陈晓辉,徐新盛,等.HPLC测定萆薢分清丸中甘草酸的含量[J].中成药,2005,27(8)：981－982.

　　[3] 刘 彤,史 浚,李 婷,等.HPLC法测定木香顺气丸中甘草酸的含量[J].天津药学,2003,15(1)：12－14.

　　[4] 郭定海,林 晓.HPLC法测定橘红片中甘草酸的含量[J].中国药品标准, 2004,5(6)：58－60.

　　[5] 高秋涛,毕开顺.HPLC法测定甘草附子汤中甘草酸和桂皮酸的含量[J].中草药,2003,34(10)：913－914.

　　[6] 裘飞君,裘学强,陈仁兴.HPLC法测定胃炎宁颗粒中甘草酸的含量[J].中国药业,2002,11(9)：39－40.