RP-HPLC法同时测定舒肝祛脂胶囊中4种大黄蒽醌的含量
【摘要】 ：目的 建立同时测定舒肝祛脂胶囊中4种大黄蒽醌类成分大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量的高效液相色谱方法。方法 采用反相高效液相色谱法,Diamonsil C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×150 mm),流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(77∶23),检测波长：254 nm,柱温：30 ℃,流速：1.0 mL/min,进样量20 μL。结果 线性范围分别为：大黄酸0.083 2～2.08 μg/mL、大黄素0.100 8～2.52 μg/mL、大黄酚0.291 2～7.28 μg/mL和大黄素甲醚0.088～2.20 μg/mL。平均加样回收率分别为：大黄酸97.3%、大黄素96.9%、大黄酚96.5%和大黄素甲醚95.9%。结论 本方法灵敏,重现性好,适合于舒肝祛脂胶囊中这4种蒽醌含量的分析。
【关键词】 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 舒肝祛脂胶囊 反相高效液相色谱法
Abstract：Objective To establish a RP-HPLC method for simultaneous quantitative determination of 4 anthraquinones in Shugan Quzhi capsules. Methods A RP-HPLC method was used with a Diamonsil C18 column (5 μm, 4.6 mm×150 mm). The mobile phase was composed of methanol and 0.1% H3PO4 water solution (77∶23, v/v). The wavelength of UV detector was 254 nm and column temperature was 30 ℃. Flow rate was 1.0 mL/min and 20 μL was injected every time. Results The linear ranges of rhein, emodin, chrysophanol and physcion were 0.083 2～2.08, 0.100 8～2.52, 0.291 2～7.28 and 0.088～2.20 μg/mL, respectively. Their average recoveries were 97.3%, 96.9%, 96.5% and 95.9%, respectively. Conclusion This method was sensitive, repeatable and suitable to determine the contents of 4 anthraquinones in Shugan Quzhi capsules.
Key words：rhein；emodin；chrysophanol；physcion；Shugan Quzhi capsule；RP-HPLC
舒肝祛脂胶囊是由柴胡、郁金、三七、大黄和黄芩等十几味中药制成的医院复方制剂,具有疏肝解郁、行气活血、化除痰湿、清热燥湿等功能,可用于治疗脂肪肝气血郁滞、痰湿互阻、湿热内蕴之证。该制剂在临床使用多年,疗效确切。本研究建立了同时测定舒肝祛脂胶囊中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚4种大黄主要蒽醌类成分的高效液相色谱法,为改进和提高舒肝祛脂胶囊的质量标准提供了方法学基础。
1 仪器与药品
高效液相色谱仪(美国Waters,2487双波长紫外检测器,510型高压双泵)；CQ-250型超声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂)；BS224S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。舒肝祛脂胶囊(本院自制,批号060801,061001, 061201)；大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为0757-200206、110756- 200110、110796-200514、110758-200509)。所用流动相甲醇为色谱纯；磷酸、盐酸、三氯甲烷和提取用甲醇为分析纯；水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(5 μm,4.6 mm×150 mm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(77∶23),流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：254 nm,进样量：20 μL。在本试验条件下,大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚与杂质完全分离,色谱图见图1。
2.2 标准曲线的制备
精密称取大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品,用少量三氯甲烷溶解后用甲醇定容至50 mL,制成浓度分别为大黄酸26 μg/mL、大黄素28 μg/mL、大黄酚56 μg/mL和大黄素甲醚11 μg/mL的对照品贮备液。分别精密量取上述对照品贮备液4.0、4.5、6.5、10 mL,用甲醇定容至50 mL,制成浓度分别为大黄酸2.08 μg/mL,大黄素2.52 μg/mL、大黄酚7.28 μg/mL和大黄素甲醚2.20 μg/mL的混合对照品贮备液。精密吸取混合对照品贮备液0.4、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、10.0 mL,用甲醇定容至10 mL,取20 μL注入色谱仪,以色谱峰面积为纵坐标,浓度(μg/mL)为横坐标,绘制标准曲线,结果见表1表1 4种成分的线性关系和回归方程
（略）
2.3 样品溶液的制备
精密称取舒肝祛脂胶囊内容物约0.36 g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,加热回流1 h,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 mL,挥去溶剂,加8%盐酸溶液10 mL,超声处理2 min,再加三氯甲烷10 mL,加热回流1 h,放冷,置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤容器,并入分液漏斗中,分取三氯甲烷层,酸液再用三氯甲烷提取3次,每次10 mL,合并三氯甲烷液,减压回收溶剂至干,残渣加10 mL甲醇使溶解,滤过,取续滤液即得样品溶液。按照样品生产工艺条件制备不含大黄的阴性样品,同法制成阴性样品溶液。