桂郁金水提物对小鼠出血与凝血时间的影响

               作者：杨秀芬，周芳，李丽花，马燕 

【摘要】  　　目的观察桂郁金水提物对小鼠出血与凝血时间的影响。方法小鼠灌胃给药(8，16，32 g·kg-1) 1次，或1次/d，连续5 d，采用剪尾法测定出血时间，毛细管法和玻片法测定凝血时间。结果一次给药，高、中剂量的桂郁金水提物能明显缩短小鼠出血时间且小剂量的桂郁金水提物能明显缩短凝血时间；1次/d，连续给药5 d，高、中剂量的桂郁金水提物对小鼠出血时间无影响，小剂量的桂郁金水提物能明显缩短出血时间，但各剂量组的凝血时间没有明显变化。结论桂郁金水提物具有一定程度的止血和凝血作用。

【关键词】  桂郁金； 凝血时间； 出血时间

　　桂郁金来源于姜科植物广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee.et C.F.Liang的块根，收载于《中国药典》Ⅰ部，与温郁金、黄丝郁金和绿丝郁金共同作为郁金入药，其性味辛、苦、寒，归肝、心、肺经，具有行气化瘀、清心解郁、利胆退黄、凉血止血之功效［1］，用于治疗经闭、痛经、胸腹胀痛、刺痛，热病神昏，癫痫发狂，黄疸尿赤等［2］。现代药理研究表明郁金具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、中枢神经抑制、保肝、降血脂、免疫抑制及促进伤口愈合等作用［2］。最近的研究表明桂郁金水提物的化学成分含倍半萜和甾类化合物,分别是zedoarolide B ( Ⅰ) 、zedoarondiol ( Ⅱ) 、zedoalactone A ( Ⅲ) 、alismoxide ( Ⅳ) 、isozedoarondiol ( Ⅴ) 、curcumenol ( Ⅵ) 和β2谷甾醇( Ⅶ) ［3］。桂郁金为广西产大宗中药材，近几年产量约占全国郁金总产量的60%以上，对我国市场有较大的影响力。但其活性的物质基础和作用机制研究报道却很少。其止血与凝血作用也未见报道。我们对桂郁金水提物的止血与凝血活性进行了初步的探究。现报道如下。

　　1  材料和方法

　　1.1  动物、药品和试剂 昆明种小鼠, 雌雄各半，由广西医科大学实验动物中心提供（合格证号：SCKX桂2003-0001）。云南白药（云南白药集团股份有限公司，批号20061020）。

　　1.2  桂郁金的提取方法［3］将桂郁金原药材（2008-08采自广西钦州市灵山县陆屋镇，经南宁市药品检验所鉴定）捣成碎块，称取2.0 kg，水浸泡2h后，煎煮两次，1h/次，滤过，合并滤液，用95%的乙醇沉淀，静置24h后滤过，合并滤液，旋转蒸发仪减压浓缩得桂郁金水提物，冰箱放置，备用。

　　1.3  急性毒性实验 根据改良寇氏法, 首先将配置好的药液稀释成不同浓度,进行预试验，测定小鼠死亡率在0%～100%的剂量范围。根据预试验的结果, 将50 只小鼠随机分成5组，按体质量1 次给药，以不同浓度的药液剂量按0.2 ml·10g-1灌服, 连续观察14 d，记录小鼠中毒症状、死亡数，观察死亡小鼠内脏器官的变化情况。用改良寇氏法计算桂郁金水提物的LD50 及其95%的可信限。

　　1.4  出血时间的测定（剪尾法）［4，5］将小鼠随机分成5组，分别一次性灌胃给予高 （32 g·kg-1）、中 (16 g· kg-1)、低(8 g·kg-1)的桂郁金水提物、云南白药（10 g·kg-1）和生理盐水，1 h后按0.1 ml/10 g腹腔注射0.7 %硫喷妥钠，待小鼠完全进入麻醉状态后，用解剖剪距小鼠尾尖3 mm处横剪断，待血液自行溢出计时，每30秒用滤纸吸血1 次，直至血液自然停止所需的时间即为该鼠的出血时间。另将小鼠随机分成5组，分别灌胃给以高 （32 g·kg-1）、中 (16 g·kg-1)、低(8 g·kg-1)的桂郁金水提物、云南白药（10 g·kg-1）和生理盐水，连续灌胃5 d，1次/d，末次给药1 h后，按上述方法测定小鼠的出血时间。

　　1.5  凝血时间的测定（毛细玻管法）［5，6］将小鼠随机分成5组，分别灌胃高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水，连续灌胃5 d。末次给药1 h后用内径1 mm，长10 cm 的玻璃毛细管插入小鼠左眼内球后静脉丛取血，血液注满后取出，平放于桌面每隔30秒折断毛细玻管约0.5 cm，并缓慢左右拉开，观察折断处是否有凝血丝，自血液流入毛细管内开始计时，至血凝丝出现为止，所历时间为毛细管该端凝血时间。另将小鼠随机分成5组，分别一次灌胃给以高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水，1 h后按照以上方法测定凝血时间。

　　1.6  凝血时间的测定（玻片法）［5，6］将小鼠随机分成5组，分别灌胃高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水，连续灌胃5 d，末次给药1 h后用毛细管于小鼠左眼内球后静脉丛取血，滴两滴在玻片上并同时计时，每30秒用清洁针头在玻片上挑血丝一次，当有血丝出现时计时完毕，即得凝血时间。另将小鼠随机分成5组，分别一次灌胃给以高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水，1 h后按照以上方法测定凝血时间。

　　1.7  统计处理

　　数据以±s表示，用Microsoft Excel进行数据处理，统计分析采用t检验。

　　2  结果

　　2.1  急性毒性试验经预试验测得该药的毒性剂量范围约为100～320 g·kg-1， 相邻两组剂量之间的比例为r=1∶0.8 较为合适。根据预试结果，设计正式实验各组的剂量，分别为：104.9 g，131.1 g，163.8 g，204.8 g，256.0 g/kg，以0.2 ml·10g-1的剂量一次性灌胃给予10只小鼠。结果见表1。表1  桂郁金水提物对各组小鼠用药、死亡情况（略）