民族药朝天罐提取物抗炎作用及机理研究

来源:岁月联盟 作者: 时间:2015-05-19

             作者:蒋霞,黎格,杨柯,杨玉芳,黄东萍

【摘要】  目的研究朝天罐提取物对不同炎症模型的抗炎作用及作用机理。方法采用醋酸腹腔注射致小鼠腹腔毛细血管通透性升高试验、二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀模型、皮下埋植棉球诱导小鼠棉球肉芽肿模型观察朝天罐提取物的抗炎作用;采用角叉菜胶致小鼠背部气囊急性滑膜炎模型,通过紫外分光光度法,测定朝天罐提取物不同剂量组中小鼠背部气囊炎性的 渗出液PGE2的含量。结果朝天罐高(20g/kg)、低(10g/kg)剂量组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀和小鼠棉球肉芽肿有明显的抑制作用;可显著降低小鼠背部气囊炎性渗出液中PGE2的含量(P<0.05)。结论朝天罐提取物具有抗炎作用;其抑制炎症组织中PGE的产生可能为抗炎作用机理之一。

【关键词】  朝天罐;抗炎;PGE2

 朝天罐Osbeckia opipara C. Y. Wu et C. Chen为野牡丹科金锦香属植物,又名张天刚、仰天罐、罐子草、七孔莲等。主产于贵州、广西、广东、台湾及长江流域以南各省区,生于海拔250~800 m的山坡、山谷、水边、路旁、疏林中或灌木丛中[1,2],为广西少数民族地区常用本草药材。主要以根入药,又名罐子草根,其味甘、微苦,性平,归肾、大肠经,功能益肾、止血、解毒,主治腰膝酸软,咯血,痢疾,咽喉痛等[3,4];亦可全株入药,用于小儿风热、久咳、咯血、胃痛、白带、月经不调、胎漏下血、痔疮出血及癌症等[5]。目前尚未见朝天罐的相关药理作用报道。本文主要对朝天罐根的抗炎作用进行研究,探讨其抗炎机理,旨在为今后药材的进一步研究与开发利用提供资料与依据。

  1仪器与材料

  1.1 仪器与试剂722型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司产);BP211D万分之一克电子天平(德国赛多利斯);阳性对照药地塞米松(广东三才医药集团有限公司,批号:20080859)。朝天罐(药材采于广西金秀瑶族自治县,经广西壮族自治区药检所鉴定);粗提取物棕褐色,每毫升浸膏相当于生药量1 g。

  1.2 动物KM小鼠(普通级),体质量18~24g,雌雄各半,由广西中医学院医学实验动物中心提供,实验动物生产许可证号:桂医动字第11004号。

  2方法

  2.1溶液制备称取药材1 000 g,加10倍量水浸泡30 min,煮沸,维持1 h,纱布过滤,药渣再加入5倍量水,煮沸,维持30 min,纱布过滤,合并滤液,浓缩至1 000 ml,冷却后,4℃冰箱放置备用。

  2.2对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响[6]取小鼠40只,雌雄各半,随机分为4组,每组10只,分别为阳性对照组(地塞米松,6 mg/kg),空白对照组(生理盐水),朝天罐高(20 g生药/kg)、低(10 g生药/kg)两个剂量组。每天灌胃给药1次,给药容量20 ml/kg,连续5 d。末次给药后60min每鼠尾静脉注射0.5%伊文斯蓝,0.1 ml/10 g,同时腹腔注射0.6%醋酸溶液,0.1 ml/10 g。15 min后,脱颈椎处死小鼠,立即注入6 ml生理盐水冲洗腹腔,剪开腹腔,用漏斗滤出腹腔洗出液,2 000 r/min离心10 min,取上清液于590 nm处测定OD值。

  2.3对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响[6]取小鼠40只,雌雄各半,随机分为4组,每组10只,分别为阳性对照组(地塞米松,6 mg/kg),空白对照组(生理盐水),朝天罐高(20 g生药/kg),低(10 g生药/kg)两个剂量组。每天灌胃给药1次,给药容量20 ml/kg,连续5 d。末次给药后60 min每只小鼠以0.02 ml二甲苯滴于右耳致炎,15 min后颈椎脱臼处死,沿耳廓基线剪下二耳。用6 mm直径打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片,称重,以左右耳重量差作为肿胀度。

  2.4对小鼠棉球肉芽肿的影响[6]取小鼠40只,随机分为空白对照组(生理盐水),阳性对照组(地塞米松,4.5 mg/kg),朝天罐高(20 g生药/kg)、低(10 g生药/kg)两个剂量组。在各鼠的左右腋下部消毒,各切一小口,各埋入消毒棉球(10 mg)。次日各组均灌胃给药,1次/d,给药容量为20 ml/kg,共14 d。末次药后1 d,取出带肉芽组织的棉球于80℃烘箱内烘7h至干,称重,减去棉球重,比较各组肉芽组织干重量。

  2.5对小鼠背部气囊炎性渗出液中PGE2含量的影响[7]取雄性小鼠50只,随机分成5组,每组10只,分别为正常组(生理盐水组)、模型组、阳性对照组(地塞米松,6 mg/kg)、朝天罐高(20 g生药/kg)、低(10 g生药/kg)两个剂量组。各组小鼠背部皮下注射空气5 ml,第3天及第6天再次注入空气各3 ml,维持气囊的膨胀,于首次注入空气的第3天开始灌胃给药或生理盐水20 ml/kg,1次/天,连续5天,末次给药后1 h囊内注射2%甲醛0.2 ml/只,6 h后处死动物,于气囊内注入冰生理盐水(含肝素50 U/ml)3 ml,轻轻按压,吸出1 ml,3 000 r/min离心10 min。取上清液0.4 ml,加0.5 mol·L-1氢氧化钾-甲醇液2 ml,在50℃水浴异构化20 min后,用甲醇稀释至5 ml,于紫外分光光度计波长278 nm处测定其吸光度(OD)值,代表PGE2的生成量。

  2.6统计学处理 应用统计软件SPSS11.0对所得实验数据进行t检验。

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