六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A含量的高效液相色谱法测定

【摘要】  目的建立六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A的高效液相色谱(HPLC)法含量测定方法。方法采用高效液相色谱法;色谱柱：Kromasil 100-5C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，检测器：蒸发光散射检测器(ELSD);柱温：室温;流动相：乙腈-水(75∶25);流速：0.8 ml·min-1，ELSD气流速度：2.00 L·min-1漂移管温度：82℃。结果被测定峰与其他组分可达到基线分离，24-乙酰泽泻醇A的线性范围为0.288～2.304 μg(r=0.999 8)，平均回收率为100.04%(RSD为1.05%，n=9)。结论该方法操作简便准确，重现性好，能有效控制六味地黄丸的质量。

【关键词】  六味地黄丸;24-乙酰泽泻醇A;高效液相色谱法

　六味地黄丸收载于《中国药典》2005年版，由熟地黄、山茱萸(制)、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻6味药物组成，原标准含量测定项中仅有丹皮酚和熊果酸的含量测定[1]，并无24-乙酰泽泻醇A含量测定方法。众所周知，泽泻醇具有利尿、降血脂、抗脂肪肝及保肝作用，为泽泻的主要活性成分。但是通过文献检索，未发现有关六味地黄方中24-乙酰泽泻醇A含量测定研究报道的文献。本实验采用高效液相色谱法测定六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A的含量，本法操作简单，专属性强，稳定可靠[2～4]。

　　1仪器与试药

　　Waters 2695高效液相色谱仪;蒸发光散射检测器(ELSD);Sartorius BP211D电子天平;HU10260B型超声波清洗器;H.H.S型电热数字显示恒温水浴锅。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。24-乙酰泽泻醇A由南京中医药大学提供，经HPLC峰面积归一化法测得含量达98%以上。六味地黄丸由怀化正好制药有限公司提供。

　　2方法

　　2.1色谱条件色谱柱Kromasil 100-5C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：乙腈-水(75∶25);柱温：室温;流速：0.8 ml·min-1;ELSD气流速度：2.00 L·min-1，漂移管温度：82℃。

　　2.2 对照品储备溶液的制备 精密称取24-乙酰泽泻醇A对照品适量，配制成浓度为720 μg/ml的储备液，待用。

　　2.3供试品溶液的制备方法取本品内容物，研细，粉末过60目筛，取约5.0 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，加入石油醚20 ml，超声处理(功率200W，频率40 kHz)2次,30 min/次，滤过，置水浴上蒸干，加乙腈定容至2 ml,滤过,即得。

　　2.4阴性对照试验 取按处方比例除去泽泻的其它药材适量，依照六味地黄丸的制备工艺和供试品溶液的制备方法得到缺泽泻的空白对照溶液，作为阴性对照溶液。按照上述色谱条件进行测定，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱上在此保留时间无干扰。见图1。

　　2.5线性关系的考察精密吸取24-乙酰泽泻醇A对照品储备液分别精密吸取对照品储备溶液1.0，2.0，3.0，4.0， 6.0，8.0 ml置50ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。浓度分别14.4，28.8，43.2，57.6 μg/ml，86.4 μg/ml，115.2 μg/ml。分别精密吸取上述溶液各20 μl，依次注入液相色谱仪，以进样浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。回归方程为：Y= 208 996X– 96 391，r=0.999 8。结果表明24-乙酰泽泻醇A在0.288～2.304 μg范围内线性关系良好。A-对照品B-样品C-缺泽泻的阴性对照图1六味地黄胶囊的24-乙酰泽泻醇A HPLC图

　　2.6 精密度实验精密吸取对照品溶液，连续进样6次，每次20 μl，根据6次的测得峰面积，计算24-乙酰泽泻醇A的RSD=1.3%(n=6)。

　　2.7稳定性实验精密吸取供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12 h分别进样，共进样5次，测得峰面积积分值，计算RSD=1.8%(n=5)，结果表明供试品溶液中24-乙酰泽泻醇A在12 h内基本稳定。