藿胆丸中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定
【摘要】 目的建立藿胆丸中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定方法。方法采用HPLC-ELSD法，色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%冰醋酸溶液(50∶50)，流速为1.0 ml/min，柱温为30℃;蒸发光散射检测器漂移管温度105℃，载气流速2.6 L/min。结果猪去氧胆酸在0.386～7.714 μg的范围呈良好线性关系，r=0.999 7，平均回收率为94.7%，RSD=2.8%(n=6);鹅去氧胆酸在0.406～8.128 μg的范围呈良好线性关系，r=0.999 5，平均回收率为92.3%，RSD=1.1%(n=6)。结论该法操作简便、可靠，可用于藿胆丸的质量控制。
【关键词】 藿胆丸;HPLC-ELSD;猪去氧胆酸;鹅去氧胆酸
藿胆丸收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部，由广藿香叶和猪胆粉两味中药组成，具有芳香化浊、清热通窍的功效，主要用于湿浊内蕴，胆经郁火所致的鼻塞、流涕及前额头痛等的治疗。《中国药典》原标准采用薄层扫描法测定方中猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量[1]，因猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的紫外吸收为末端吸收，采用薄层扫描法测定其含量灵敏度低，误差较大，且与高效液相色谱法相比，薄层扫描法本身具有操作繁琐复杂、检测限度较低等不足，因此，本文采用高效液相色谱蒸发光散射检测法对方中猪胆粉中的猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量进行了测定，完善并提高了该制剂质量控制标准，以便更好地控制该制剂的质量。
1仪器与试药
1.1仪器岛津 LC-10AT VP高效液相色谱仪;ALLTECH ELSD 2000ES型蒸发光散射检测器;CLASS-VP色谱工作站;色谱柱：Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm，5 μm);空气压缩机。
1.2试药猪去氧胆酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：0087-200610);鹅去氧胆酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：0806-200303);HPLC流动相所用乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水;二氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇、氢氧化钠等试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件与系统适应性[2，3]色谱柱：Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);柱温：30℃;流动相：乙腈-0.1%冰醋酸溶液(50∶50)，流速：1.0 ml/min;蒸发光散射检测器(ALLTECH ELSD 2000ES型)，漂移管温度105℃，载气流速2.6 L/min。理论板数按猪去氧胆酸峰计算不得低于4 000。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取猪去氧胆酸对照品和鹅去氧胆酸对照品适量，分别置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，制成浓度为0.192 8 mg/ml的猪去氧胆酸对照品溶液和浓度为0.203 2 mg/ml的鹅去氧胆酸对照品溶液，即得。
2.2.2供试品溶液的制备[2~5]取藿胆丸粉末约0.6 g，精密称定，置锥形瓶中，分别加入10%氢氧化钠溶液25 ml，摇匀，在120℃皂化5 h，冷却，转移至50 ml量瓶中，加水分次洗涤锥形瓶并定容至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 ml，用盐酸调节pH值至1，用二氯甲烷振摇提取4次(20，40，30，30 ml)，分取二氯甲烷层，用铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过，合并二氯甲烷，回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例称取除猪胆粉外的其他药材，以藿胆丸“制法”项下的方法制成缺猪胆粉的阴性对照样品，并根据“2.2.2”项的方法制成阴性对照溶液。
2.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪进行测定。结果表明，猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸与其他峰分离良好，阴性无干扰。见图1。
2.3线形关系的考察分别精密吸取猪去氧胆酸对照品溶液(0.192 8 mg/ml)和鹅去氧胆酸对照品溶液(0.203 2 mg/ml)2，6，10，20，30，40 μl进样，测定，以进样量的对数值为横坐标、峰面积的对数值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为：猪去氧胆酸Y=1.423 8X+6.093 7(r=0.999 7)，鹅去氧胆酸Y=1.429 5 X+5.968 1(r=0.999 5)。结果表明猪去氧胆酸在0.386～7.714 μg的范围呈良好线性关系，鹅去氧胆酸在0.406～8.128 μg的范围呈良好线性关系。
2.4精密度实验精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液10 μl，按上述色谱条件连续进样6次，记录猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸的峰面积。结果猪去氧胆酸峰面积RSD为0.7%(n=6)，鹅去氧胆酸峰面积RSD为0.5%(n=6)，表明精密度较好。
2.5重复性实验取同一批藿胆丸细粉(王老吉药业股份有限公司，批号：080301)6份，每份约0.6 g，精密称定，分别按供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液。结果猪去氧胆酸平均含量为8.94 mg/g，RSD为3.9%(n=6);鹅去氧胆酸平均含量为5.81 mg/g，RSD为3.8%(n=6)。