余甘子叶中槲皮素的定性定量分析研究

　　2.2.4溶液制备对照品溶液的制备：精密称取10 mg槲皮素标准品，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液;精密吸取储备液0.4 ml，置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为槲皮素对照品溶液(40 μg/ml)。供试品溶液的制备：精密称取余甘子叶药材粉末0.2g，置50 ml锥形瓶中，精密加入5%盐酸的甲醇溶液25 ml，称量，超声1 h，用5%盐酸的甲醇溶液补重，过滤，水浴蒸干，加甲醇溶解至25ml量瓶中，定容至刻度，用微孔滤膜(0.45 m)滤过，作为供试品溶液。

　　2.2.5线性关系考察分别精密吸取对照品储备液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml置于10 ml量瓶中，定容后摇匀，得10，20，40，60，80，100 μg/ml系列浓度对照溶液，按上述色谱条件分别注入色谱仪10μl，测定槲皮素峰面积，以槲皮素峰面积(Y)为纵坐标，以槲皮素进样浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线并求得槲皮素标准曲线回归方程为Y=85 266X+154 568(n=6)，r=0.999 8，表明槲皮素进样的浓度在10~100 μg/ml范围呈良好的线性关系。

　　2.2.6精密度实验分别取对照品溶液和供试品溶液，各连续重复进样6次，测定样品中槲皮素峰面积积分值并计算相对标准偏差，测得对照品溶液平均值为：3 258 144，RSD=0.60%;供试品溶液平均值为：4 097 378，RSD=1.62%。

　　2.2.7稳定性实验取供试品溶液，在上述色谱条件下，10 h内间隔一定时间进样，测定样品中槲皮素峰面积积分值并计算相对标准偏差，测得平均值为：4 129 149，RSD=1.47%。

　　2.2.8重复性实验精密称取同一批余甘子叶样品各6份，按“供试品溶液的制备”项下进行操作，测定槲皮素的含量(mg/g)并计算相对标准偏差，结果测得槲皮素平均含量为7.008 7 mg/g，RSD=1.75%(n=6)。

　　2.2.9加样回收率实验分别精密称取已测知槲皮素含量(7.0087 mg/g)的余甘子叶粉末样品，共9份，每份0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，按低(0.607 2 mg)、中(0.708 4 mg)、高(0.809 6 mg)3个不同的加入量，精密加入槲皮素对照品溶液(1.012 mg/ml)。混匀后按供试品溶液制备和槲皮素含量测定方法提取、测定，计算平均回收率，结果平均回收率为101.0%，RSD=1.89%。

　　2.2.10样品测定取不同产地余甘子叶样品，按上述方法进行含量测定。结果见表2。表2余甘子叶中槲皮素含量测定结果

　　3讨论

　　本实验建立了余甘子叶中槲皮素的定性定量分析方法，方法简便、快速，专属性强，重现性好，可作为余甘子叶的质量控制方法。本实验测定了不同产地的余甘子叶，结果均能检出槲皮素，但含量有所差异，且相差较大。流动相的配比对槲皮素的色谱峰有较大影响，甲醇-0.2%磷酸为60∶40时，槲皮素出峰时间较快，样品中槲皮素峰未能与其他杂质峰有较好地分离;甲醇-0.2%磷酸为50∶50时，槲皮素出峰时间相对较慢,但与相邻峰的分离效果最好，色谱峰形对称，因此选择50∶50的流动相配比。

【参考文献】
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　　[2]Anila L,Vijayalakshmi NR.Antioxidant action of flavonoids from Mangifera indica and Emblica officinalis in hypercholesterolemic rats[J].Food chemistry，2003,83(4):569.

　　[3]陈德昌.中药化学对照品工作手册[M].北京：中国医药科技出版社，2000：169.