蛇鳞草提取液体外抑菌作用研究
作者：钟希文，梅全喜，高玉桥，林慧，胡莹
【摘要】 目的对蛇鳞草提取液体外抑菌作用进行初步研究。方法采用试管二倍稀释法测定蛇鳞草的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。结果蛇鳞草水提液对金黄色葡萄球菌的MIC为63 mg/ml，MBC为500 mg/ml，对大肠杆菌的MIC为250 mg/ml。蛇鳞草醇提液对金黄色葡萄球菌的MIC为125 mg/ml，MBC为500 mg/ml，对大肠杆菌的MIC为250 mg/ml，MBC为500 mg/ml。两种提取液对绿脓杆菌均未呈现抑菌活性。结论蛇鳞草提取液具有一定的抑菌和杀菌活性。
【关键词】 蛇鳞草； 抑菌活性； 最低抑菌浓度； 最低杀菌浓度
蛇鳞草Abacopteris triphylla (Sw.) Ching，又名蛇退步、三枝标、三叉蕨、入地蜈蚣，为蕨类金星蕨科新月蕨属三羽新月蕨的干燥全草［1］。主产于广东，在福建、广西、云南、台湾等地也有出产。蛇鳞草味辛、苦，性平，具清热解毒，散瘀消肿、化痰止咳的功效，主要用于痈疮疖肿、毒蛇咬伤、跌打损伤、湿疹、皮肤瘙痒以及急、慢性支气管炎的治疗。但其仅作为一种民间中草药在使用，国内外对其研究甚少，曾有报道其化学成分主要为三羽新月蕨苷（Triphyllin）A、B、C［2］。20世纪70年代初期，广东省中山市中医医院以蛇鳞草为主药研制成“复方蛇鳞草散”及“复方蛇鳞草膏”，临床上用于治疗毒蛇咬伤、甲沟炎、皮炎、湿疹、痈疮疖肿等病症，应用至今疗效确切，为该院中医皮肤科、外科特色专药。蛇伤专科以蛇鳞草为主药研制的“蛇黄散”，用于治疗初期疮疡，蛇伤虫咬肿痛等［3～5］，其疗效显著，为中医院蛇伤专科的特色专药。梅全喜等［6］报道了“蛇黄散”具有抗炎、镇痛的药理作用，然而，目前尚未见相关蛇鳞草体外抑菌活性等方面的文献报道。本实验观察蛇鳞草的体外抑菌作用，为充分发掘其市场潜力，开发其可利用性提供实验参考。
1 材料
1.1 实验材料与试剂蛇鳞草原植物采集于广东中山市五桂山，经鉴定为蛇鳞草Abacopteris triphylla(Sw.) Ching。实验菌株：金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、大肠杆菌（ATCC 25922）、绿脓杆菌（ATTC 27853），均由中山市中医院检验科提供。培养基：营养琼脂（广东环凯微生物科技有限公司，批号：200901071）、营养肉汤（广东环凯微生物科技有限公司，批号：200810267）。其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器UV-754型紫外分光光度计；BS224S型电子天平（北京赛多利仪器系统有限公司）；LMQR-4060型立式灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司）；PYX-DHS-35×40型隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；XSW-CJ-2A标准型净化工作台（吴江市津化设备总厂）。
2 方法与结果
2.1 培养基的制备
2.1.1 营养琼脂培养基准确称取3.3 g营养琼脂至250 ml锥形瓶中，加入100 ml蒸馏水，加热至全溶，调整pH为7.4，封瓶口后灭菌备用。
2.1.2 营养肉汤培养基准确称取9g营养肉汤至500 ml锥形瓶中，加入500 ml蒸馏水，加热至全溶，调整pH为7.4，封瓶口后灭菌备用。
2.2 溶液制备
2.2.1 蛇鳞草水提液的制备称取50g蛇鳞草干品，剪碎放入烧杯中，加适量蒸馏水浸泡30 min后加热煎煮1 h，经过滤得第一次煎液；药渣再加入适量蒸馏水加热煎煮1 h。合并两次水煎液，浓缩至每毫升药液相当于含生药1g。
2.2.2 蛇鳞草醇提液的制备称取50g蛇鳞草干品，剪碎放入圆底烧瓶，加入适量稀释至60%的乙醇液，安装回流装置，加热回流1 h，过滤得第1次醇提液；药渣再加入适量乙醇液加热回流1 h，过滤。合并两次滤液，浓缩至每毫升药液相当于含生药1g。
2.2.3 麦氏比浊标准液［7］的配制 用电子天平称取1.175 6 g氯化钡，蒸馏水定容至100 ml，配成0.048 mol/L氯化钡溶液；再量取1 ml 95%浓硫酸，加入94 ml蒸馏水，配成0.18 mol/L硫酸溶液。0.048mol/L氯化钡0.5 ml加0.18 mol/L硫酸溶液99.5 ml，混匀后用530 nm波长比色调整其浊度，使吸光度为0.1该浊度为0.5麦氏比浊标准，相当于5×（107～108）CFU/ml。
2.2.4 菌液［8］的配制实验菌种经平板分离培养24 h后，挑取数个菌落置于生理盐水试管中，校正浓度至0.5麦氏标准，再用营养肉汤1∶100稀释，使含菌量达到106 CFU/ml为工作浓度。
2.3 最低抑菌浓度（MIC）判定标准首先在观察细菌对照组长菌呈浑浊状，而药物对照组不长菌，呈透明清亮状的前提下，再观察实验组试管的浑浊情况，以判断不同浓度药液的抑菌作用，如试管内呈浑浊，表明有细菌生长，用“＋”表示；如试管内透明清亮，表明无细菌生长，用“-”表示。