云南不同产地滇龙胆中龙胆苦苷的含量测定

                作者：来国防，程宾，罗士德，王易芬

【摘要】  目的建立HPLC法测定云南不同产地滇龙胆中龙胆苦苷的方法。方法色谱柱为Waters Sunfire RP18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱，流动相为甲醇-水溶液(20∶80)，柱温35℃，体积流量1.0 ml/min，检测波长270 nm。结果龙胆苦苷在0.077 4 ～ 1.160 4 mg(r = 0.999 8)线性关系良好，平均回收率为98.8%(RSD = 1.86%，n = 9)，检测10批样品其龙胆苦苷的含量在2.75% ～4.87%之间。结论该方法简便快速、准确，可为评价滇龙胆药材质量提供依据。

【关键词】  高效液相色谱法; 滇龙胆; 龙胆苦苷

　　Abstract：ObjectiveTo establish the method of the gentiopicroside in the plant of Gentiana rigescens from different regions in Yunnan province by HPLC.

　　MethodsThe Watres Sunfire C18(4.6mm×250mm, 5μm)was used, with mixture liquid of methanol and water(20:80)as mobile phase. The detection wavelength was 270 nm, the column temperature was 35℃, and the flow rate was 1.0ml/min.

　　ResultsGentiopicroside showed a good linear relationship within the range of 0.0774 ～ 1.1604 mg(r = 0.9998), the recovery rate was 98.8%, and RSD was 1.86% (n = 9). The gentiopicroside content of Gentiana rigescens in 10 different regions was within the range of 2.75%～4.87%.

　　ConclusionThe method is simple and accurate，and can be used to identify and evaluate the quality of Gentiana rigescens.

　　Key words：HPLC; Gentiana rigescen; Gentiopicroside

　　龙胆为常用中药，《中国药典》收载龙胆Gentiana scabra Bge.，条叶龙胆G. manshurica Kitag.，三花龙胆G. triflora Pal1.或坚龙胆G. rigescens Franch.的干燥根及根茎，前3种习称“龙胆”，后一种习称“坚龙胆”。坚龙胆主产云南又称为滇龙胆。滇龙胆含多种化学成分，如环烯醚萜类，生物碱类，挥发油类等，其中环烯醚萜类是其特征性成分，其功效有清肝火、除湿热、健胃等[1]。为充分利用云南丰富的龙胆药材资源，本实验以龙胆苦苷为指标成分，采用HPLC法测定了采自云南不同地区的10份滇龙胆样品，为评价滇龙胆药材质量提供一定的科学依据。

　　1 材料

　　1.1 样品来源实验所用滇龙胆样品，经中国科学院昆明植物研究所罗士德研究员鉴定，为龙胆科滇龙胆G. rigescens Franch.的干燥根及根茎，其植物标本存放于中国科学院昆明植物研究所。

　　1.2 仪器与试药 美国Waters 2695高效液相色谱仪及其配套工作站，DAD检测器检测，甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)，水为二次蒸馏水，0.45 μm针式微孔滤膜，其他试剂均为分析纯，龙胆苦苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110770-200510，供含量测定用。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件色谱柱为Waters Sunfire RP18(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相为甲醇-水溶液(20∶80)，柱温35℃，体积流量1.0 ml/min，检测波长270 nm。

　　2.2 对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品9.67 mg置入25 ml 容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，即得。

　　2.3 供试品溶液的制备取滇龙胆干燥的根粉碎后过4号筛，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率20 kHz)15 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，混匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.4 线性关系考察精密吸取龙胆苦苷对照品溶液2，5，10，15，20，30 μl注入液相色谱仪进行测定。以峰面积(Y)对进样浓度(X)进行回归处理，得到龙胆苦苷回归方程为：Y= 12 887 230X – 147 037.8(r = 0.999 8)，线性范围为0.077 4 ～ 1.160 4 mg/ml。见图1～2。图1 龙胆苦苷对照品图2 滇龙胆样品

　　2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，测定龙胆苦苷峰面积，结果其RSD为1.40%，表明仪器的精密度良好。