降香总黄酮提取工艺的正交设计实验优选

【摘要】  目的优选提取降香中总黄酮的最佳工艺。方法采用正交实验设计，以总黄酮提取量为指标，对降香总黄酮提取条件进行优选。结果最佳提取工艺为10倍量70%乙醇在90℃提取3次，1.5h/次，测得总黄酮平均提取量为92.13mg，平均含量为4.61%。结论该提取工艺条件简单、稳定、提取效率高。

【关键词】  降香总黄酮; 正交实验; 提取方法

　　中药降香是豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T.Chen的树干和根的干燥心材。降香的功效为行气活血，止痛，止血，用于治疗脘腹疼痛，肝郁胁痛，胸痹刺痛，跌扑损伤，外伤出血[1]。降香的主要成分为挥发油和黄酮类化合物，其中，降香檀药材中总黄酮的含量为2.51%～5.82%[2]。黄酮类化合物具有抗炎、镇痛、抗氧化、中枢神经作用及心血管方面的作用[3]。本课题组对降香进行了系统研究，建立了一个适合降香总黄酮的含量测定方法[4]。本文应用该含量测定方法，以降香总黄酮提取量为考察指标，通过正交设计实验进行工艺优化，对提取总黄酮的条件和影响因素进行了探讨，为降香总黄酮的提取工艺提供了科学依据。

　　1 仪器与材料

　　1.1 仪器UV-2450紫外可见分光光度仪(SHIMADZU)，电子分析天平(BP211D)，HH-4型恒温水浴锅(江苏省金坛市宏华仪器厂)，RE 52-98型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。

　　1.2 试剂乙醇(分析纯，汕头市西陇化工厂)，甲醇钠(新制)。

　　1.3 药材和对照品降香药材(广州市药材公司中药饮片厂，产地海南)，柚皮素对照品(实验室自制，经UV、1H-NMR鉴定结构，HPLC检测计算，纯度大于98%)。

　　2 方法

　　2.1 降香总黄酮含量测定方法及工作曲线的确定精密称取柚皮素对照品0.001 43 g，用70%乙醇溶解并定容至50 ml备用。分别精密吸取对照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml于10 ml容量瓶内，准确加入1 ml甲醇钠，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，放置40 min，在410 nm处测定其吸光度。计算得回归方程为Y=3.242 2X-0.019 3，r=0.999 8，线性范围是0.014 3～0.085 9 mg。

　　2.2 正交实验设计根据影响总黄酮的提取因素，在预试验的基础上，选取提取时间(A)，提取次数(B)，提取温度(C)，乙醇浓度(D)作为考察因素，每个因素设定3个水平，以总黄酮提取量为考察指标，采用L9(34)表安排正交实验。结果见表1。表1 正交实验因素和水平

　　2.3 样品溶液的提取及含量测定将干燥的降香药材粉碎，精密称量2 g/份，按照L9(34)正交实验表的工艺条件加入10倍量乙醇进行回流提取。提取液合并蒸干后用70%乙醇定容至25 ml，取1 ml各提取液稀释至10 ml，再取1 ml稀释液按对照品测定方法测量其吸光度并计算总黄酮提取量。结果见表2。表1 L9(34)正交实验设计和结果

　　2.4 方差分析上述实验所用正交表无空白列作对照，所以将离差平方和中最小的项来近似作为误差的估计，用于计算各因子列的F比值[5]，本实验采用“提取时间(因素A)”项作为误差来源项，对表2的总黄酮含量进行方差分析。结果见表3。表3 方差分析

　　2.5 最佳提取工艺的验证精密称取3份降香粉末各2 g，按最佳提取工艺条件平行操作，提取液定容至25 ml，按“2.3”项下方法测定吸光度并计算总黄酮提取量和提取率。结果见表4。表4 最佳提取工艺验证