白藜芦醇对于异抗原刺激下大鼠T淋巴细胞活化增殖的影响
2.6 统计学分析本实验数据采用统计软件包SPSS12.0处理，以±s表示，多样本单因素方差分析(one way-ANOVA)， 重复资料组间比较MANOVA检验，P<0.05认为具有显著性差异。
3 结果
3.1 加入不同干预药物对共培养细胞中T淋巴细胞增殖抑制率的影响结果见表1表1 实验组内加入不同干预药物共培养细胞中T淋巴细胞增殖抑制率 3.2 加入不同干预药物对共培养细胞上清中IL-2活性的影响见表2表2 实验组内加入不同干预药物共培养细胞上清中IL-2活性的测定
4 讨论
异位腹腔心脏移植是一种简便、实用、有效的观察排斥反应发生机制的动物模型，一直用于器官移植后的免疫排异反应研究。 SD与Wistar大鼠为封闭群大鼠, 是一种高排斥反应的组合，SD→Wistar的同种异体移植可以引发强烈的急性排斥反应, 本实验移植模型术后5日移植心脏镜下：移植心脏组织内排斥反应的强度(Standford标准分级)2级及其以上53例(60例)。
本实验首先建立SD-Wistar大鼠腹腔异位心脏移植模型，5 d后取已发生急性排异反应受体Wistar脾脏分离脾细胞(单个核细胞)作为反应细胞，同时分离供体系SD大鼠单个心肌细胞经丝裂霉素C处理后作为刺激细胞,体外持续刺激受体Wistar脾脏分离脾细胞，作为心脏移植后急性排异反应的体外模型，观察RSV对T淋巴细胞的作用。
脾细胞中含有大量的单个核细胞, 而后者含有大量的树突状细胞和巨噬细胞，当混合培养MHC抗原(主要组织相容性抗原)不一致时，它们作为抗原呈递细胞(Antigen presented cells，APC)激活T辅助(Th)细胞,同时释放IL-1,进一步激活Th细胞,出现增殖,分化,产生细胞毒T细胞(CTL)破坏心肌细胞, 产生效应T淋巴细胞释放IL-2、γ-IFN、TNF等,促进心肌细胞表面表达MHC 类抗原,MHC 类抗原可被CTL识别而导致心肌细胞的破坏,MHC 类抗原可激活Th细胞,促进T细胞增殖、分化,正反馈性加强上述反应,产生急性排异反应，最终结果为对心肌细胞的杀伤和淋巴细胞的大量增殖，模拟了体内急性排异反应过程[2]。
本实验也观察到该模型的确可引起T细胞增殖以及细胞因子的改变，达到了模拟心脏移植后体内急性排异反应的目的。CSA及RSV在本模型下可以改变T细胞增殖以及细胞因子的浓度,同时观察到RSV对活化的T淋巴细胞增殖有明显的抑制作用，但离体实验中发现其作用强度差于环孢霉素A，其作用有一定的剂量依赖性，但当其离体细胞培养浓度等于或低于25 μmol/L时作用微弱，与空白组无显著性差异，当RSV 50 μmol/L与环孢霉素A100 nmol/L合用时抑制效果优于两者同浓度单用，当联合应用两者时，保持环孢霉素A100 nmol/L培养浓度将RSV浓度减少至37.5 μmol/L时，其抑制效果无显著性差异。
白细胞介素2(IL-2)主要由活化T细胞分泌产生，而它又促进着T细胞的进一步活化与增殖;IL-2通过自分泌或旁分泌途径与IL-2受体结合而刺激淋巴细胞增殖及IL-2的进一步分泌而起作用，IL-2在急性排斥反应是调节T细胞增殖分化的一个非常重要的细胞因子,IL-2促进移植后免疫排斥反应发生、发展，并妨碍着免疫耐受的成功诱导和维持。本实验观察到RSV对体外混合培养上清中IL-2作用强度弱于CSA，但与CSA合用有明显的协同作用。
RSV能双向调节T淋巴细胞的增殖,低浓度促进抗CD3、抗CD28所诱导CD8+和CD4+T淋巴细胞增殖,高浓度抑制增殖, 对于CTL细胞的增殖和NK细胞毒活性的激活具有同样的效应。试验中发现RSV (0.75~6 μmol/L)剂量依赖性地促进小鼠T淋巴细胞的增殖和白细胞介素2的产生; RSV (25 mmol/L)能明显抑制T细胞的增殖和溶解细胞的产生[4],抑制IL-2基因的表达。RSV的免疫调节机制比较复杂，可能是几种机制共同作用的结果，也可能还有到现在还未知的其他途径的作用结果[5]。
【参考文献】
[1] 王亭忠，席雨涛，吴格如. 大鼠成体心肌细胞的分离和培养[J]. 第四军医大学学报，2005，25( 17)：1544.
[2] 马涛, 胡 军, 蔡振杰，等. 体外混合淋巴细胞培养对心脏移植急性排斥反应的监测作用[J].第四军医大学学报，2006，27(1)：27.
[3] Rogers EA.Lympholcine requirements for the development of specific cytotoxic T cells from single precursor[J].EUR J Immunal1991,24(13): 1069.
[4] 黎永胜，文 军.白葵芦醇的药理作用研究进展[J].医学综述，2008，14(3):469.
[5] 周玲芝，尹 进.白藜芦醇酒剂对小鼠免疫功能影响的研究[J].湖南中医药大学学报，2009, 29(1):41.