枸杞多糖诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的实验研究

  　　3 讨论

　　细胞凋亡又称为细胞程序性死亡。通过细胞凋亡可保持机体组织的动态平衡， 是机体自我调控的重要机理。目前认为，许多肿瘤的发生就是由于该肿瘤细胞凋亡通道受阻而引起的。因此诱导肿瘤细胞凋亡成为抗肿瘤药共同的新靶点。甚至有学者认为细胞凋亡是不同作用机理抗癌药物殊途同归的结果[4，5]。

　　本实验通过多个方面证明,枸杞多糖可诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡。从形态学上可见典型的凋亡特征,如细胞形态不规整,细胞核固缩,核碎裂,可见凋亡小体, MTT 染色可见新月状或边界分明的颗粒块状浓染区。枸杞多糖可显著抑制肿瘤细胞Eca-109的生长,其抑制率可达96.02%,有明显的剂量依赖关系。流式细胞仪检测结果显示,枸杞多糖处理的细胞,其DNA 直方图上可见G1期峰前出现明显的细胞凋亡峰。最大剂量组的凋亡率可达20.3%。肿瘤细胞都有其自身的生长周期规律,一般G0/G1 期时间最长,故G0/G1 期细胞比率最高,而G2/M期时间较短,处于G2/M期细胞比率最低，不同的抗肿瘤药可能对不同增殖周期具有选择性。流式细胞仪检测结果显示,枸杞多糖对人食管癌Eca-109细胞增殖周期有明显影响,药物使G2/M期细胞比率明显增加。这表明肿瘤细胞被阻止于G2/M期，更多的细胞损伤过重，超过了自身修复能力,难以通过G2 期限制点而发生凋亡[6]。细胞凋亡的另一重要生化特征是细胞核内限制性内切酶激活，将DNA 切成许多核酸片段，从而使DNA琼脂糖凝胶电泳分析时，呈现典型的DNA 梯形电泳条带。

　　钙离子是细胞内的重要信息介导物质，通常称为第二信使。文献记载，当细胞内钙离子浓度过高，线粒体钙超载时，最终导致线粒体膨胀破坏，细胞能量耗竭，多种蛋白水解酶、磷脂酶激活，细胞色素C与凋亡诱导因子释放，细胞膜崩解，细胞死亡。故细胞内钙离子浓度与细胞凋亡有正相关性，了解细胞内钙离子浓度是确定细胞凋亡的重要依据[7，8]。LSCM检测结果显示,枸杞多糖处理组Eca-109细胞内Ca2+浓度明显高于对照组，药物浓度越大，Ca2+浓度增加越明显，这一结果进一步证实枸杞多糖有诱导Eca-109细胞凋亡作用。

【参考文献】
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　　[2] Gan L ，Zhang S H，Yang X L ，et al.Immunomodulation and ant itumor activity by apolysaccharide protein complex from Lycium barbarum [J]. Int Immunopharmacol，2004，4(4) : 563.

　　[3] 曹广文，杨文国.枸杞多糖联合LAK/IL-2疗法对75例晚期肿瘤的疗效观察[J].中华肿瘤杂志，1994，16(6)：428.

　　[4] 范京惠，左玉柱，李一经. 细胞凋亡的研究进展[J].东北农业大学学报，2005，36 ( 6) : 804.

　　[5] 季宇彬，高世勇，张秀娟. 羊栖菜多糖诱导肿瘤细胞凋亡的研究[J]. 中国中药杂志，2004，29 ( 3) : 245.

　　[6] 张泰松，程树仓，臧恒昌，等. 去甲斑蝥素诱导细胞凋亡的研究进展[J].海峡药学，2005，17 ( 3) : 125.

　　[7] 王春梅，黄晓峰，杨家骥，等. 激光扫描共聚焦显微镜技术[M].西安: 第四军医大学出版社，2004：71.

　　[8] 孙恩杰，闫玉华，徐运华. 钙稳态失衡与癌细胞抑制[J].生物化学与生物物理进展，2001，28 ( 5) : 635.