大口静灰球生药学研究

　　2.3.4 方法学考察

　　标准曲线的绘制：精密称取麦角甾醇对照品适量，加流动相制成1 mg/ml的对照品溶液，即得。进样量分别为9，12，15，18，21 μl，注入液相色谱仪，以相应含量为横坐标，峰面积为纵坐标，峰面积分别为9 710.56，13 047，16 370.9，19 749.4，23 081.5，进行线性回归，得回归方程为Y=1 114.8X-330.27，r=1，表明其在9～21 μg线性范围良好　　精密度实验：精密称取麦角甾醇对照品，加甲醇制成1 mg/ml的对照品溶液，精密吸取对照品溶液15 μl，注入高效液相色谱仪，重复5次，记录峰面积积分值分别16 975，16 472，16 157，16 446，16 429，结果RSD 1.80%，结果表明精密度良好。稳定性实验：取提取的同一样品，依照供试品溶液制备方法，于0，2，4，8，12，24，48，72 h，分别测定峰面积，记录峰面积积分值分别为17 629，17 390，17 748，17 428，17 526，17 236，17 632，17 895。实验结果表明，样品溶液在72 h内测定，色谱峰无明显变化，RSD1.20%，表明样品在72 h内稳定重复性实验：取提取的同一样品溶液5份，平行操作，测定麦角甾醇的含量，峰面积分别为20 832，20 856，20 863，20 888，20 902,计算其RSD为0.13%。表明实验重复性良好。回收率实验：精密称取已知含量的样品，分别精密加入麦角甾醇对照品7.0 μg，按供试品溶液的制备方法及上述高效液相色谱条件操作，测定其含量，计算回收率。结果见表1表1 大口静灰球中麦角甾醇加样回收率实验结果样品中含量m/μg麦角甾醇m/μg测得值m/μg回收率(%)平均值(%)　　2.3.5 含量测定取大口静灰球子实体，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.3”项下色谱条件进样测定，计算大口静灰球提取液中麦角甾醇的含量，结果分别为1.713，1.721，1.709 mg/g，平均值为1.714 mg/g(见图4)。麦角甾醇在9～21 μg范围内呈良好的线性关系，加样平均回收率为100.48%，RSD为1.26%。方法稳定可靠，准确性高，操作简单。A.对照品; B.样品

　　图4 大口静灰球HPLC图

　　3 小结

　　通过大口静灰球粉末显微鉴别，发现其孢子的特征可作为区别于其他马勃类药材(例如大马勃、脱皮马勃、紫色马勃等)的主要鉴别依据，为临床合理用药提供依据。

　　采用高效液相色谱法测定大口静灰球中子实体中麦角甾醇含量，在流动相为甲醇，检测波长为282 nm，柱温为25℃，理论塔板数按麦角甾醇计不低于3 000的条件下，麦角甾醇在9～21 μg范围内呈良好的线性关系，加样平均回收率为100.48%，RSD为1.26%。方法稳定可靠，准确性高，操作简单，可应用于大口静灰球的质量控制，为马勃进一步的研究提供了参考[6]。

【参考文献】
  　[1] 邓志鹏，孙隆儒.中药马勃的研究进展[J].中药材，2006,29(9):996.

　　[2] 崔 波，王法云，古奕庆，等.河南的马勃目资源研究[J].河南科学，1995，13(4)：343.

　　[3] 郑汉臣 ，蔡少青.药用植物学与生药学[M]. 北京：人民卫生出版社，2005：385.

　　[4] 李建宗.中国硬皮马勃属研究[J].湖南师范大学自然科学学报，2003，26(4)：60.

　　[5] 胥艳艳，赵会珍，刘 磊，等.脱盖马勃属两个中国新纪录种[J].菌物学报，2007，26(2)：179.

　　[6] Han FM. Separation and determination of Baicalin in Prescriptions containing Scutellaria baicalensis Georgi by HPLC[J].Chi J Chomatogr，2000，18(3)：280.