溃克灵对溃疡性结肠炎模型大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ T细胞亚群的影响

　　调节性T细胞(regulatory T cell，Tregs)是一类不同于T辅助细胞(T helper cell，Th)1和Th2的具有免疫调节功能的T细胞亚群，在多种免疫性疾病中起重要调节作用，最早由Sakaguchi等提出，可诱导宿主上调表达，通过细胞-细胞间直接接触和释放IL-10、TGF-β等细胞因子抑制自身反应性T细胞的增殖活化，下调Th1的功能，在维持机体免疫功能平衡，形成外周免疫耐受中起着重要的作用。目前已认识的调节性T细胞主要包括分泌高水平IL-10的Tr1、分泌TGF-β为主的Th3及特异性表达叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)的CD4+ CD25+调节性T细胞，CD4+ CD25+调节性T细胞对于其他两种调节性T细胞的发育有重要作用。Foxp3是调节T细胞发育的一个重要开关，可促进CD4+ CD25ˉ T细胞转换为CD4+ CD25+ 调节性T细胞，目前研究认为，Foxp3特异性表达在CD4+ CD25+Tregs细胞，可有效地预防UC的发生[5]。

　　正常肠黏膜组织中，效应T细胞和调节性T细胞处在动态平衡状态，以维持肠道内环境的稳定，保持肠黏膜免疫系统的稳定。如果效应T细胞过度增生或免疫原性增强，效应T细胞的作用远远超过调节性T细胞，或者调节性T细胞数量减少或功能异常，均可打破二者平衡，导致肠黏膜损伤，从而诱发炎症性肠病的发生。肠道是人体与外界抗原接触的主要场所，因此肠道的局部反应需要精密地调节以避免对食物性抗原和正常菌群产生免疫反应，同时又能有效地防御病原体，在人体以及动物模型中的研究显示，调节性T细胞在保持肠道稳态中起重要作用，是肠道和平的监护者。

　　目前研究认为CD4+ CD25+ Tregs细胞在肠道黏膜免疫-炎症反应中起关键作用。CD4+ CD25+调节性T细胞具有两大特性：即免疫无能性和免疫抑制性，其免疫无能性对高浓度IL-2的单独刺激，固相包被或可溶性抗CD3单抗，以及抗CD3单抗 、抗CD28单抗的联合作用呈无应答状态，也不分泌IL-2，当经T细胞受体(TCR)介导信号刺激并有高浓度外源IL-2存在的情况下，CD4+ CD25+调节性T细胞可活化并增殖，但其增殖程度较CD4+ CD25+Tregs细胞弱。CD4+ CD25+Tregs细胞的免疫抑制功能表现在经TCR的信号刺激活化以后通过直接接触和细胞因子依赖等方式抑制CD4+和CD8+ T淋巴细胞的增殖和活化，并且这种抑制作用为非抗原特异性，不具有组织相容性抗原(MHC)限制性。CD4+ CD25+Tregs细胞膜表面还可组成性表达抑制性调节分子CTLA-4和GITRE，并下调树突状细胞(dendritic cell，DC)的活化，从而达到免疫抑制效应。

　　CD4+ CD25+Tregs细胞亚群在小鼠实验性溃疡性结肠炎的发病及病情转归中具有重要免疫调节作用，大量资料证实其数量缺乏或功能缺陷与UC的发生有关。郭敏等[6]研究发生UC的大鼠，肠系膜淋巴结(MLN)中CD4+ CD25+ T细胞的比例正常明显下降，CD4+ T细胞比例增加，表明在UC中由于CD4+ CD25+ T细胞的异常，机体出现免疫失衡，使得效应性CD4+ T细胞附集于炎症损伤的肠黏膜内，导致消化道黏膜免疫系统处于高活性状态，诱发肠道免疫反应增强，对自身抗原发生不耐受，损伤性免疫因子(如TNF-α、IL-10等)的释放增加，引起肠粘膜的损伤。安晓霞等研究发现中药灌肠1号和柳氮磺胺吡啶均能较好调控小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+Tregs细胞数量和功能的增加，一方面可有效抑制过度的免疫反应，另一方面可调节机体的免疫平衡，维持机体内环境的相对稳定，达到有效治疗UC的目的[7，8]。王晓娣[5]研究UC患者CD4+ CD25+ T细胞占CD4+ T细胞的比例明显低于对照组(P<0.01)，并且与疾病的活动指数及血沉水平均呈显著负相关(P<0.01);UC患者 Foxp3 mRNA的表达也明显低于对照组(P<0.01)，得出UC患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞明显降低，与疾病活动性相关，提示这类细胞可能在UC的病理机制中发挥作用，Foxp3表达降低可能是导致CD4+ CD25+ T细胞发育障碍的重要因素。

　　UC的治疗一直为临床难点，目前临床上西药常用免疫抑制剂治疗，但疗效也不甚理想，且毒副作用大。中药方剂中不乏具有抗炎、止泻、黏膜保护、抑制免疫反应等作用的药物，可辨证施治，适当选用[9]。中药KKL以猴头菌为君药，其味甘性平，归脾胃经，补脾益气、利五脏、抗肿瘤，近年报道猴头菌提取物能调节机体的非特异性免疫(巨噬细胞的吞噬作用)和特异性免疫(主要由淋巴细胞介导的细胞免疫和体液免疫)功能，改善肠黏膜的免疫状态，具有抗氧化作用，能有效清除氧自由基，减轻局部炎症损害，促进炎症消退，改善肠黏膜血液循环及营养状态，促进肠黏膜上皮细胞再生、组织修复和溃疡愈合[10]，并具有黏膜保护作用和良好的免疫调节作用[11，12]。方剂中的半枝莲、黄连、厚朴、苍术等具有抗菌消炎、生肌、调节肠道功能等作用[13~15]，故以半枝莲、黄连、厚朴、苍术为臣;佐以调和气血之白芍，兼能柔肝缓急止痛，清热凉血之马齿苋、槐花;使以健脾利湿之厚朴、土茯苓。全方选药精炼，共奏补脾解毒、清热利湿、排脓敛疮、调和气血、凉血止血、止痛止痢之功。KKL先期实验研究已经证实，中药KKL对TNBS模型大鼠结肠炎的发生具有一定预防保护作用，可能与下调CD4+/CD+8比值、抑制促炎因子IL-1β分泌和促进抗炎因子IL-10分泌等免疫调节机制有关[16]。本实验结果表明，中药KKL对UC大鼠一般状态，结肠大体损伤和病理组织学损伤均有较好的改善作用,可以看出KKL是一种有效的治疗UC的药物，提高UC模型大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ 调节性T

　　细胞可能是其治疗机制之一。但复方中药制剂的实际作用机制可能更为复杂，有效成分尚不清楚，及KKL对Foxp3基因表达的影响等仍需今后进一步深入研究加以阐明。

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