HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量

　　2.4  线性关系考察

　　分别精密吸取辣椒碱和二氢辣椒碱对照品溶液,分别进样10、15、20、25、30、35、40 μL,按上述色谱条件分析测定。以峰面积(A)为纵坐标,进样量(mg)为横坐标绘制工作曲线,得辣椒碱和二氢辣椒碱回归方程,分别为：Y＝5.54×106X－3.7×104(r＝0.999 9)；Y＝2.29×106X－3.3×105(r＝0.995 5),线性范围分别为1.955～7.820 μg和2.709～7.224 μg。

　　2.5  精密度试验

　　分别吸取辣椒碱和二氢辣椒碱同一对照品溶液,重复进样6次,20 μL/次,测定其峰面积,计算其RSD分别为0.24%和0.92%,表明仪器精密度良好。

　　2.6  稳定性试验

　　精密吸取同一样品溶液20 μL,分别于0、4、12、24、36、48 h进样分析,分别测定峰面积,计算其RSD,结果辣椒碱峰为0.92%,二氢辣椒碱峰为2.35%,表明样品溶液在48 h内稳定性良好。

　　2.7  重复性试验

　　精密称取6份辣椒精油样品0.03 g,按“2.3”项下方法制得供试品溶液,分别进样20 μL,分别计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱含量,结果其RSD分别为0.69%和0.72%。

　　2.8  加样回收率试验

　　精密称取10份已测知辣椒碱和二氢辣椒碱含量的辣椒精样品0.03 g,分为2组,分别准确加入辣椒碱0.02 mg和已知浓度的二氢辣椒碱对照品溶液,依法测定,并计算加样回收率,结果见表1、表2。表1辣椒碱加样回收率试验结果 表2二氢辣椒碱加样回收率试验结果

　　2.9  样品测定

　　取辣椒精油样品约0.03 g,精密称定,以甲醇溶解,经0.45 μm微孔滤膜过滤后,超声脱气30 min,按上述色谱条件进行分析测定。以20 μL进样测定色谱峰面积,根据标准曲线计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱的质量分数。结果辣椒碱平均质量分数为51.59%,RSD＝0.69%,二氢辣椒碱的平均质量分数为49.72%,RSD＝0.72%。

　　3  讨论

　　本试验为了能在适宜的分析时间内获得指标成分的完全分离,对流动相体系进行了反复摸索,随着流动相甲醇-水的比例变化(75∶25、70∶30、65∶35、60∶40),出峰时间逐渐延长,峰高逐渐变小,峰面积也逐渐变小,分离度差。故最终确定用70∶30比例洗脱。

　　试验中还对辣椒精水样、天然辣椒碱进行了含量测定。结果方法稳定可靠,重复性好,适合于辣椒总碱的质量控制。