HPLC法测定羧甲司坦无糖口服溶液中羧甲司坦的含量及有关物质

【摘要】  目的 建立羧甲司坦的含量测定及有关物质检测的方法。方法 采用HPLC法，以C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）为色谱柱，以0.68%磷酸二氢钾和0.05%己烷磺酸钠（pH2.5）为流动相，检测波长为215 nm。结果 羧甲司坦在0.44～1.3 mg·mL-1范围内，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系（r=0. 999 9），平均回收率为99. 5%，RSD为1.1%（n=9），最低检测限为 8.27 ng，各杂质峰与主峰达到基线分离。结论 本法简便、专属性及重现性好，可用于羧甲司坦含量及有关物质的测定。

【关键词】  羧甲司坦 反相高效液相色谱法 有关物质

羧甲司坦为半胱氨酸的巯基取代衍生物，2005年版中国药典收裁了该品种（含糖型），采用茚三酮显色比色法测定其含量［1］，也有文献报道采用HPLC蒸发光散射检测法［2］和柱前衍生荧光检测法［3］与反离子对色谱法［4］测定其含量和有关物质。本文采用反相离子对液相色谱法测定羧甲司坦的含量和有关物质，试验结果表明，该方法简便、专属性强、准确度高和重现性好。

　　1    仪器与试药  
     
　　美国Agilent1100高效液相色谱仪，二极管阵列检测器（DAD），ChemStation System 工作站。
      　　
　　羧甲司坦对照品（中国药品生物制品检定所），羧甲司坦口服溶液（无糖型，批号：051101、051102、051103，  规格：0.2 g/10 mL，由广州白云山制药总厂提供），己烷磺酸钠（分析纯，由Pure Chemical Analysis Co.,Ltd.提供），其他试剂均为分析纯。

　　2    方法与结果

　　2.1    含量测定

　　2.1.1    溶液的制备    对照品溶液的制备: 精密称取羧甲司坦对照品50 mg，置50 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1NaOH溶液5 mL，使溶解，并加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
      　　
　　供试品溶液的制备：精密量取本品适量，加水稀释制成每1 mL中约含羧甲司坦1 mg的溶液。
      　　
　　空白辅料溶液的制备：取辅料适量，按照处方配比，制成不含主药羧甲司坦的空白溶液。

　　2.1.2    色谱条件和系统适用性试验    色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：0.  68%磷酸二氢钾和0.05%己烷磺酸钠，用磷酸调pH值2.5；检测波长：215 nm；进样量：10 μL。理论塔板数按羧甲司坦计算为5 000，羧甲司坦峰与相邻峰的分离度符合规定，阴性对照无干扰。色谱图见图1。

　　A.羧甲司坦对照品;B.羧甲司坦无糖口服溶液供试品;C.阴性对照品    1．羧甲司坦 
   
　　图1    羧甲司坦无糖口服溶液的HPLC谱图（略）

　　Figure 1    HPLC of chromatogram

　　2.1.3    线性试验    精密称取羧甲司坦对照品适量，置100 mL容量瓶中，加0.1 mol·L-1NaOH溶液5 mL，使溶解，加水稀释制成每1 mL中约含羧甲司坦2.2 mg的贮备液，分别精密量取适量，配制成系列浓度，按上述色谱条件测定，以羧甲司坦的质量浓度（ρ）对其相应的峰面积（A）作回归方程，结果在0.  44～1.3 mg·mL-1浓度范围呈良好的线性关系：A=1966.1ρ+16.771,r=0.999 9（n=6）。

　　2.1.4    精密度试验    取同一份对照品溶液，连续进样6次，结果峰面积和保留时间的RSD分别为0.  14%和0.45%,表明试验精密度良好。

　　2.1.5    重复性试验    精密量取羧甲司坦口服溶液适量，平行6份，分别测定含量，结果其RSD为0.  60%。

　　2.1.6    稳定性试验    制备供试品溶液，分别在0、2、4、6 h进样，6 h内测定结果的RSD为0.35%。

　　2.1.7    空白加样回收率试验    按处方比例制备空白对照液，分别加入3种比例的羧甲司坦对照液，按“2.1.2”项色谱条件进样测定回收率，结果平均回收率为99.5％，RSD为1.1%，见表1。

　　2.1.8    样品的测定     取供试品（批号 051101、051102、051103）按“2.1.1”项方法制备供试液，并按“2.1.2”项色谱条件进样测定，3批供试品的平均含量分别为101.1%、101.9%、101.4%。

　　2.2    有关物质测定 

　　2.2.1    测定法    量取本品适量，加水稀释制成每1 mL中含羧甲司坦2 mg的溶液作为供试品溶液；精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；按“2.1.2”项下的色谱条件，取对照溶液10 μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的30%；精密量取供试品溶液与对照溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。

　　表1    羧甲司坦加样回收率试验结果（略）

　　Table 1    Results of recovery test

　　2.2.2    专属性    对照品溶液：精密称取羧甲司坦对照品50 mg，置50 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1NaOH溶液5 mL，使溶解，并加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。