RP-HPLC 法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量

【摘 要】 目的 建立RP-HPLC 法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量。方法 色谱柱：资生堂 C18（250×4.6 mm，5μm）; 流动相：乙腈-水（30：70）；流速：1.0ml·min-1；检测波长：270 nm。结果 淫羊藿苷在0.0408～0.2040μg·ml-1的范围内，线性关系良好，r=0.9993；平均回收率：96.1%，RSD=0.56%（n=6）。结论 方法简便，快速，结果准确，可用于参芪二仙片的质量控制。
  【关键词】 参芪二仙片；淫羊藿苷；反向高效液相色谱法
  参芪二仙片含有红参、黄芪、当归、仙茅、淫羊藿、巴戟天、黄柏、知母成分。原标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册。具有补肾填精，调补冲任，益气养血的功效。用于肾虚腰膝酸软，阳痿早泄，遗精，妇女更年期经血不调等症[1]。原标准中质量控制项只有性状、显微鉴别项和检查项，没有含量测定。本实验建立了对处方中淫羊藿的淫羊藿苷含量测定方法，科学合理有效地控制了药品质量，提高了药品质量标准[1]。
  1 仪器与试药
  1.1 仪器
  日本岛津LC-2010C HT 高效液相色谱仪；日本岛津LC Solution 色谱工作站。电子分析天平（瑞士，d=0.01mg）。
  1.2 试药
  淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110737-200415）；水为二次蒸馏水，甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈均为色谱纯，其余试剂均为分析纯；参芪二仙片（沈阳红药制药有限公司，批号：20090202、20090203、20090204）。
  2 方法与结果
  2.1 对照品溶液的制备
  取淫羊藿苷对照品10.012 mg，精密称定，加甲醇制成每1 ml 含10.012 μg 的溶液，即得。
  2.2 供试品溶液的制备
  取本品10 片，除去糖衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，加入50%乙醇溶液50ml，加热回流30 分钟，放冷，滤过，用50%乙醇溶液洗涤残渣及滤器3 次，每次10ml，合并滤液及洗液，蒸至近干，残渣加水20ml 使溶解，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取5 次，每次15 ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 阴性对照溶液的制备
取除淫羊藿柏以外的其它药材，按制法中工艺制备阴性样品。其它操作同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.4 色谱条件
色谱柱：资生堂C18（250×4.6 mm,5μm）；检测波长为；流速为1.0 ml·min-1；流动相为乙腈-水（30：70）；理论板数按淫羊藿苷峰计算不低于5000；按上述色谱条件，分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性液各进样10μl，记录色谱图（见图1）。结果表明在淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照溶液在此峰位无吸收，对本品中淫羊藿苷含量测定无干扰，淫羊藿苷峰与其它组分峰分离完全[2.3]。

 
  2.5 线性关系考察
  精密称取淫羊藿苷对照品10.20mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液。（0.1020mg·ml-1）。分别精密吸取对照品溶液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl 分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，将峰面积对其相应的浓度进行回归处理，得回归方程：Y=1.36×106X＋1.46×104，r=0.9993，表明淫羊藿苷对照品进样量在0.0408～0.2040μg 范围内线性关系良好。
  2.6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10ul 连续进样6 次，测定峰面积，RSD 为1.8%，表明本法精密度良好。
  2.7 重复性试验
  取批号20090202 的样品6 份，按2.2 项下供试品溶液制备方法试验，测定样品中淫羊藿苷的含量，平均值0.2494 mg.g-1,RSD 为1.6%.表明方法重复性良好.
  2.8 稳定性试验
  取同一供试品溶液在0、2、4、6、12、24h 分别进样10 ul，测定峰面积，RSD 为1.8%，结果表明供试品溶液在12 小时内稳定。满足方法要求.