HPLC法测定独子藤中雷公藤红素的含量
2.3供试品溶液的制备
取独子藤药材适量，粉碎过40目筛，精密称取10.0 g，装入100 mL带塞三角瓶中，加入三氯甲烷超声提取3次，每次50 mL，每次30 min。静置，滤取上清液，旋转蒸发仪上浓缩至干。称取4.0 g硅胶装柱(1.5 cm×10 cm)，以三氯甲烷1 mL超声溶解样品，上样。先以三氯甲烷50 mL进行洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇(体积比95∶5)100 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，旋转蒸发仪上浓缩至干。残渣用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，045 μm微孔滤膜滤过。平行操作5份，作为1~5号供试品溶液。[PSd041;S*2〗A.对照品; B.供试品图1雷公藤红素的HPLC色谱图Figure 1HPLC chromatograms of reference
2.4线性关系的考察
分别精密吸取“2.2”项下对照品贮备液1、2、3、4、5 mL置于5 mL容量瓶中，分别用甲醇溶解并定容，摇匀，制得系列对照品溶液。依次取上述溶液各20 μL进样，依法测定。以雷公藤红素的峰面积积分值(A)为纵坐标，质量浓度(ρ)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为A=5.5886×103ρ-2.0127×104(r=0.999 1)。结果表明，雷公藤红素在40~200 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.5精密度试验
精密吸取同一雷公藤红素对照品溶液20 μL，连续进样6次，测得雷公藤红素的峰面积RSD为196%，结果表明仪器精密度良好。
2.6稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样，依法测定，结果雷公藤红素峰面积的RSD为298%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.7重复性试验
取同一批次的独子藤药材，称取5份，按“2.3”项下方法处理并进样测定，结果雷公藤红素峰面积的RSD为2.59%，表明本方法重复性良好。
2.8加样回收率试验
取独子藤药材6份，各5 g，精密称定，分别按低、中、高不同质量精密加入雷公藤红素对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表1。表1加样回收率试验
2.9样品测定
分别精密吸取“2.3”项下1~5号供试品溶液20 μL，注入色谱仪，依法测定。每份测3次，计算，结果其雷公藤红素的质量分数分别为0.054 7%、0056 2%、0.055 3%、0.054 0%、0.057 2%，平均值为0.055 5%，RSD为2.26%。
3讨论
3.1本研究对不同样品前处理方法效果进行了考察，比较了三氯甲烷超声提取后直接进样与三氯甲烷超声提取后经硅胶柱层析纯化再进样的色谱图。结果显示，前者杂质峰数目较多，对色谱柱的污染较大;而后者能有效去除其他极性杂质，雷公藤红素色谱峰与其他峰分离良好，测定无干扰。
3.2本研究在参照文献[5-7]的基础上，考察了不同流动相的分离效果。结果表明流动相为甲醇-体积分数5%H3PO4水溶液(体积比80∶20)时，雷公藤红素的峰形对称且能与其他成分良好分离，同时亦有利于独子藤中其他成分的含量测定。
3.3本文方法测得独子藤中雷公藤红素的平均质量分数为0.055 5%，相对较高，提示可将独子藤作为雷公藤红素的药用植物资源加以开发利用，具有重要意义。且雷公藤红素的毒性很大，建立并完善雷公藤红素的含量测定方法，亦有助于安全合理地利用独子藤药材。
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