海带中褐藻糖胶的超声提取工艺的优化
2.3海带褐藻糖胶提取液的制备
取海带粉末(40目)5.0 g，按试验要求以不同超声提取时间、超声功率、固液比和提取温度进行提取，得到的上清液浓缩至体积为原来的1/3，加入3倍体积的95%(体积分数)乙醇，离心，得到的沉淀用丙酮洗涤，得到褐藻糖胶粗品。将粗品溶于蒸馏水中，减压抽滤，将滤液转移入100 mL的容量瓶中，定容,即得。
2.4褐藻糖胶的提取量的计算
按下列公式计算褐藻糖胶的提取量：EY=x1(mg)x0(g)式中：EY为海带中褐藻糖胶的提取量(mg·g-1)，x0为提取前海带粉末的质量(g)，x1为提取物中褐藻糖胶的质量(mg)。
2.5单因素试验
2.5.1超声提取温度的影响
称取含海带粉末50 g、固液比为1∶20的样品溶液，分别在30、40、50、60 ℃的水浴，以320 W的功率超声30 min，其他步骤同“2.3”。随着温度的升高，褐藻糖胶的提取量迅速增大，当温度升高到50 ℃时，提取量的增大速度减慢，直至趋于平衡。故褐藻糖胶的提取应控制在一定的温度范围内。
2.5.2超声功率的影响称取含海带粉末5.0 g、固液比为1∶20的样品溶液，于40 ℃的水浴中，以200、240、280、320、360、400 W功率分别超声30 min，其他步骤同“2.3”。在超声功率为200~320 W范围内，褐藻糖胶的提取量随超声功率的提高而增大，在功率为320 W时，提取量达到峰值。
2.5.3超声提取时间的影响称取含海带粉末50 g、固液比为1∶20的样品溶液，在40 ℃的水浴中，以320 W的功率分别超声10、20、30、40、50、60 min，其他步骤同“2.3”。在提取时间为30 min时，提取量达到最大值32 mg·g-1。此后随着时间的延长，提取量反而减小。
2.5.4固液比的影响称取含海带粉末5.0 g、固液比分别为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40的样品溶液，在40 ℃的水浴中，以320 W的功率超声30 min， 其他步骤同“2.3”。 在固液比为 1∶20~1∶30的范围内，提取量迅速增大，曲线的斜率明显增大。但在1∶30~1∶40的范围内，褐藻糖胶提取量的增大趋于平缓。
2.6正交试验
以超声提取时间、超声功率、固液比和超声提取温度为因素，设计了四因素三水平正交试验，因素水平表见表1。正交试验中每个试验的海带粉末质量均为5.0 g。
2.7 验证试验
称取海带粉末5.0 g，精密称定。以优选出来的最佳提取工艺重复实验3次，测定褐藻糖胶的提取量。
3结果与分析
3.1正交试验正交试验结果如表2、3所示。表1因素水平表表2正交实验结果与直观分析表3方差分析表由表中可知，4个因素对褐藻糖胶提取量的影响程度由大到小依次为：C>D>A>B，即提取时间>固液比>提取温度>提取功率，优化工艺条件为A2B2C2D3，即：提取时间为30 min，固液比为1∶30，温度为40 ℃，功率为320 W。
3.2验证试验
3次重复试验测得褐藻糖胶的提取量分别为19.86、19.88和19.93 mg·g-1，平均提取量为1989 mg·g-1，RSD为1.51%，结果稳定，表明该工艺合理可行。
3.3超声提取与常规提取方法的比较
比较了超声提取法与常规提取法的提取结果，见表4。表4超声法和常规提取法提取效果比较
4讨论
4.1本试验对超声法、水提法、酸提法所得褐藻糖胶提取量进行了对比。结果显示，超声提取2次，每次30 min所得的海带褐藻糖胶提取量与100 ℃热水提取5 h相当，可大大缩短提取时间。且经热水提取离心所得的提取液呈深棕色，明显比超声提取的提取液颜色深，提示利用超声波作为海洋生物多糖提取手段能有效减少色素的析出，在实际应用中可简化除色素等预处理步骤。通过对超声提取与常规提取方法的对比可知，超声提取具有时间短、能耗低等优势，且提取工作在低温下进行，可避免高温对提取成分的破坏，同时可以减少提取过程中色素的析出。故超声提取技术是一种良好的多糖提取新工艺，具有很好的发展前景。
4.2本实验采用正交设计法对海带中褐藻糖胶超声提取工艺进行了优化，研究结果表明超声法提取海带中褐藻糖胶的最佳工艺条件为：提取时间30 min，固液比1∶30，提取温度40 ℃，超声功率320 W。
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