唐古特青兰提取物齐墩果酸的药代动力学研究

               作者：廖敬礼，顾健，李婧，张亮亮，钟锋，姚峰

【摘要】  目的建立测定齐墩果酸血浆浓度的HPLC方法，研究唐古特青兰醇提取物中齐墩果酸的药代动力学规律。方法采取甲醇-水(85∶15，V/V)为流动相，Diamonsil C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)为固定相，紫外检测波长为215 nm测定，大鼠灌胃给药3.0，1.5 g/kg，用HPLC法测定给药大鼠血浆中齐墩果酸的含量，采用药代动力学软件DAS(ver2.0)处理，得到齐墩果酸的药代动力学参数。结果大鼠灌胃高剂量和低剂量给药的齐墩果酸主要参数分为AUC0-t 为49 450.915 mg/( L·min)和37 336.884 mg/( L·min)，tl/2为85.154 min和55.215 min。结论齐墩果酸在大鼠体内的代谢符合一室模型，吸收、消除较快。

【关键词】  唐古特青兰; 齐墩果酸; 药代动力学; 高效液相色谱

　唐古特青兰又名甘青青兰( Dracocephalum tanguticum Maxim，简称DtM)，藏文译音“知羊格”，是藏医常用药材，属多年生唇形科草本植物，生长在海拔1 900～4 600 m的青藏高原。其性寒、味甘苦，可清肝胃之热，用于治疗胃炎、肝炎、头晕、关节炎、胃溃疡、神疲等[1]，主含黄酮苷、挥发油、氨基酸、甾类、齐墩果酸、熊果酸、胡萝卜苷等[2]。研究发现，DtM的醇提液可以有效降低大鼠的血糖浓度，具有降血糖的药理作用，DtM水提液可升高缺氧动物红细胞 SOD含量、清除氧自由基，降低整体耗氧量，具有抗心脑组织缺氧的作用，可改善缺氧造成的血液流变学异常、血小板减少、右心室肥厚及组织病理学损伤。其药用价值显著，但目前对唐古特青兰用于治疗这方面疾病的研究不少，大多数对其在体内的代谢还不清楚，或仅限于理论上的论述，不便于对其进行研究和利用，且未见文献报道。为此我们对DtM的醇提液中齐墩果酸在大鼠体内的代谢进行药代动力学研究。

　　1 材料与仪器

　　1.1 动物 健康Wistar雄性大鼠12只，体质量(250±50)g，由四川省实验动物中心提供，合格证号：SCXK[川]2008-14。

　　1.2 仪器 岛津LC-10AT高效液相色谱仪;Diamonsil C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);SPD-M10Avp UV-VIS检测器;CTO-1OA柱温箱;C-R7Ae色谱数据处理仪;SIL-1OADvp自动进样器;旋转蒸发仪(上海夏丰实业有限公司);精密天平(沈阳龙腾电子有限公司);台式高速离心机;HY调速多用振荡仪(江苏正基仪器有限公司);YGL系列氮吹仪(成都雅源科技有限公司);微孔滤膜(0.45 μm)。

　　1.3 试剂及药品 甲醇;醋酸乙酯;无水乙醇;高纯水(自制);肝素;唐古特青兰(采自青海，经成都中医药大学中药室鉴定为唇形科植物唐古特青兰的带根全草。)

　　1.4 药物的制备 取115 g原药材，加入700 ml 95%的乙醇溶液中，加热煮沸2h，过滤，通过旋转蒸发仪回收乙醇，浓缩成相当于生药量0.45，0.90g/ml的溶液，保存备用。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件Diamonsil C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(85∶15，V/V);柱温30 ℃ ;流速 1.0 ml/min;检测波长215nm。

　　2.2 血样处理 在100 μl血浆加入0.1 ml乙酸乙酯，振荡5 min，6 000 r/min离心，取上清液，加0.3 ml甲醇沉淀蛋白，振荡5 min，6 000 r/min离心，取上清液，50℃氮气吹干。用1.0 ml流动相溶解，取10 μl进样分析，测定峰面积。

　　2.3 对照品溶液的制备 取对照品恒温干燥至恒质量，精密称取5.0 mg 齐墩果酸对照品，置5.0 ml容量瓶中，用流动相溶解，超声5 min，定容至5.0 ml，得到1.0 mg/ml 对照品溶液。

　　2.4 标准曲线的制备 精密量取大鼠空白血浆0.1 ml，分别加入齐墩果酸标准品，配制成血浆浓度分别为:10，20，30，40，50 μg/ml血浆溶液,按上述血样处理过程处理，分别取10 μl进样，记录峰面积，以峰面积值(Y)对齐墩果酸的浓度(X)进行线性回归。

　　2.5 精密度实验取大鼠空白血浆0.1 ml，用标准品配制成浓度分别为10，20，40 μg/ml的血浆溶液，按“2.2”项操作，测定样品峰面积。代入标准曲线方程，计算测得浓度，考察日内和连续5d的日间变异情况。

　　2.6 回收率实验分别用空白血浆配制齐墩果酸质量浓度为10，20，40 μg/ml，的样品， 按“2.2”项操作，测定样品峰面积。代入标准曲线方程，计算测定浓度。

　　2.7 动物实验大鼠给药前禁食，自由摄水，实验随机分为两组,每组6只，分别为高、低剂量组。按3.0 g/kg, 1.5 g/kg灌胃给药。给药后5，10，20，30，45，60，90，120，180，240，360 min后分别于尾静脉取血，每次取血0.5 ml于肝素处理的离心管中，离心，取100 μl上清液，按“2.2”项操作。

　　2.8 药动学参数计算 所得血药浓度-时间( C-T)数据用药代动力学分析软件DAS(ver2.0)程序处理。