槲皮素抑制卵巢癌细胞生长的作用研究

                              作者：曾维诚 张艺  段承刚 何涛  刘佳佳

【摘要】 目的  观察槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响，为寻找治疗卵巢癌的新药物提供实验依据。方法  运用细胞培养、光镜观察及MTT法测定细胞活性等方法，对比卵巢癌细胞在槲皮素作用不同时间后的生长情况和细胞活性，探讨槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响。结果  加入50μmol/L槲皮素后，卵巢癌细胞的生长受到明显的抑制，且呈时间依赖性。结论  槲皮素能够抑制卵巢癌细胞的生长。
【关键词】 槲皮素  卵巢癌细胞  抑制
        槲皮素（Quercetin, Que）是一类广泛分布于被子植物的花叶部分的黄酮类化合物，研究发现槲皮素具有扩张冠脉、降血脂、清除自由基、抗炎、抗过敏、调节免疫及抗肿瘤的作用[1]。而卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，早期诊断困难，化疗药物治疗副作用大、疗效差，因此寻找价格低廉，副作用小，疗效好的药物成为卵巢癌治疗的一个重要突破口。本实验拟通过观察槲皮素对卵巢癌细胞株SKOV3生长的影响，为槲皮素应用于卵巢癌的临床治疗提供实验资料和理论依据。
        1.材料和方法
        1.1 试剂和器材
        卵巢癌细胞株由四川大学华西医院妇产科惠赠；槲皮素购自Sigma公司；RPMI-1640，胎牛血清（FCS）购自Gibco公司；MTT购自北京华瑞生物公司。其它试剂均为国产分析纯。
        C-2323型CO2培养箱为美国Slshelab公司产品；MAXIMASC型超纯水仪为英国Eega Demon公司产品； EXL-800型酶标仪为美国BIO-TEK公司产品；XDS-1B型倒置相差显微镜为重庆光学仪器厂产品。
        1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养  将卵巢癌细胞株培养于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，于37℃，CO2含量5％，湿度90％的CO2培养箱中培养。至对数生长期时观察细胞形态并离心收集细胞，待用。
        1.2.2 细胞分组  将上述细胞按5×104个细胞/ml的浓度重悬于RPMI-1640培养基中，接种于96孔培养板，并将细胞随机分为空白对照组（以生理盐水代替槲皮素），槲皮素组（槲皮素终浓度为50μmol/L），每组设5个复孔，分别培养12h、24h、36h和48h。培养过程中采用倒置相差显微镜观察细胞形态并拍照。
        1.2.3 细胞活性检测  依据参考文献[2]，采用四氮唑盐（MTT）还原法检测细胞活性。分别于加入药物12h、24h、36h和48h后再加入MTT溶液（5mg/ml）20ul，继续培养4小时，吸出培养液，每孔加入200ul二甲亚砜震荡10min后，用全自动酶标仪490nm波长下测定各孔的吸光度（A值），并计算细胞生长抑制率。
        细胞生长抑制率(％)＝1－(实验组A值÷空白孔A值)×100％。 
        1.2.4 实验数据处理  所得结果以均值±标准差表示，组间和组内比较采用F+q检验，p＜0.05为差异有显著性。所有处理均在SPSS15.0 for windows统计软件包中进行。
        2. 实验结果
        2.1 形态学观察
        倒置显微镜下，空白对照组SKOV3细胞呈单层生长，多角形或短梭形，胞核圆形或椭圆形，胞浆透亮，部分细胞内可见分泌颗粒；槲皮素组细胞胞体变长，胞浆透明度下降，细胞膜皱缩，细胞边界模糊，颗粒感增强，部分细胞胞突回缩变圆，脱落呈悬浮状，可见细胞碎片。