辛温解表法对小鼠粘膜免疫功能的影响
【摘要】 目的研究辛温解表法对粘膜免疫屏障的干预作用。方法流感病毒感染小鼠，用药3 d后观察呼吸道粘膜上皮的病理改变，检测气管纤毛运动时间以及支气管肺泡灌洗液、肠灌洗液中黏多糖、分泌性免疫球蛋白A的含量。结果辛温解表三方能改善流感病毒感染小鼠气管粘膜上皮的病理损伤，其中麻黄汤、桂枝汤能增加支气管肺泡灌洗液和肠灌洗液中sIgA的含量，麻黄桂枝各半汤能增加肠灌洗液中sIgA的含量；3方对灌洗液黏多糖的含量以及气管纤毛运动的影响各有侧重。结论辛温解表法对呼吸道粘膜屏障的干预作用或许是其治疗外感热病的关键环节之一。
【关键词】 辛温解表；粘膜免疫分泌性免疫球蛋白A
Abstract：ObjectiveTo study the mucosal immunological mechanism of Xinwen Jiebiao prescription for influenza. MethodsInfluenza virus FM1 mouse lung-adapted strain was intranasally inoculated to mice. KM mice were randomly divided into five groups. (1)Normal control group, (2) model control group, (3) Mahuang decoction, (4)Guizhi decoction, (5)Mahuangguizhi each half decoction group. 3 days after administration, these mice were all killed, the injury changes in mice airway and the ciliary movement was observed under light microscope (LM). The levels of sIgA and mucopolysaccharides was detected in the bronchus alveolus lavage fluid (BALF) and intestinal lavage fluid(ILF). ResultsCompared with model control group，Xinwen Jiebiao prescription attenuated phathological change of bronchus mucosal epithelia, improved the ciliary movement, and there were significant differences in sIgA and mucopolysaccharides.ConclusionThe mucosal immunological mechanisam may be the key of the Xinwen Jiebiao prescription against influenza.
Key words：Xinwen Jiebiao； Mucosal Immunological Mechanism； sIgA
“汗法”为“八法”之首，有辛温解表、辛凉解表之分，对外感热病初起有立竿见影的效果，现代药理研究虽然从解热、镇痛、抗炎、抗菌抗病毒以及免疫调节等多个方面对其疗效机制进行了阐释，但仍有诸多令人疑惑之处：“汗法”与非甾体类抗炎药、抗生素、抗病毒药、免疫增强剂等相关化学药品药理作用相去甚远，而临床治疗外感热病却能取得相当的效果；化学药品用于外感热病常常病情反复，而“汗法”则往往“汗出而解”。对此类相关问题，现有研究成果难以对此作出合理的解释。这些问题提示我们，“汗法”应存在其它的作用环节和途径。本文以麻黄汤、桂枝汤、麻黄桂枝各半汤为工具方，研究辛温解表法对粘膜屏障的干预作用，试图对辛温解表法的作用机制进行合理的阐释。
1 材料与仪器
1．1 药物
桂枝汤原方：桂枝、白芍、甘草、生姜各9 g，大枣12枚；麻黄汤原方：麻黄、苦杏仁各9 g，桂枝、炙甘草各6 g；桂枝麻黄各半汤原方：二汤各取1/3合并；组成、剂量、煎煮法参考《中医方剂大辞典》。
1．2 动物
昆明种小鼠，雌雄各半，体质量18～22 g，清洁级，合格证：医动学第04057号。清洁级动物实验环境，温度（20±1）℃ ；照明：明暗各12 h；湿度60％～70％。
1．3 流感病毒
甲l型流感病毒FM1鼠肺适应株由四川大学微生物教研室提供，经鸡胚尿囊腔接种，制备新鲜毒种，-70℃冰箱冻存备用。
1. 4 试剂和仪器
sIgA ELISA试剂盒（ADL），咔唑(北京化学试剂厂)，D-葡萄糖醛酸内酯（CAS），酶标仪，Diareader ELX800C,Dialab。
2 方法
2.1 对小鼠气管粘膜病理改变的影响
将昆明种小鼠随机按体质量(18～22 g)分层随机分为正常对照组(NS)、模型对照组(NS)、阳性对照组（0.1 g/kg）、麻黄汤组（7.5 g/kg,相当于人用剂量15倍）、桂枝汤组（24 g/kg,相当于人用剂量15倍）、桂枝麻黄各半汤组（10.5 g/kg，相当于人用剂量15倍），每组10只。灌胃给予药物或等体积NS（0.1 ml/10g），1次/d，连续3 d。给药前24 h，各组小鼠在乙醚轻度麻醉下鼻腔感染甲l亚型流感病毒FM1鼠肺适应株，0.2 ml/只。末次给药后1 h，断颈处死小鼠并分离气管约1 cm,10%甲醛溶液固定。
2.2 对小鼠纤毛运动的影响
（CM）动物分组、给药同“2.1”，断颈处死小鼠并快速从喉头至支气管分叉处分离气管，置于通O2的新配台氏液中，剪取气管0.5 cm并纵向切开，斜放于预先经37℃台氏液湿润的脱脂棉花上(喉头端朝上)，将0.05 cm细丝(直径0.15 mm)置于气管标本下端，倒置玻片，恒温(26℃)下用(带刻度)低倍倒置显微镜观察并记录细丝移动1 mm所需时间(min/mm)。每观察1次后，将气管标本放入37℃台氏液中漂洗1次，每个标本连续观察2次，取均值。
2.3 呼吸道液黏多糖测定
（RS,咔唑比色法）动物分组、给药同“2.1”。断颈处死小鼠并暴露气管，从喉头处行气管插管，缓慢推注37℃ 预温的生理盐水1.5 ml，回抽此液，重复2次，离心取上清液，按文献方法［1］当天检测。每份标本分为2个稀释度，每个稀释度测定2次，取均值。用3 mmol/L氯化钠稀释D-葡萄糖醛酸内酯储存标准液配成25～300 μg/ml并制作标准曲线。
