两种常见产超广谱β
【关键词】 肺炎克雷伯氏菌；大肠埃希氏菌；β
［摘 要］ 目的：筛选检测肺炎克雷伯氏菌及大肠杆菌的超广谱的β内酰胺酶(ESBLs)的敏感方法，并探讨肺炎克雷伯氏菌及大肠杆菌产ESBLs的情况与耐药的关系，为临床合理使用抗生素提供实验依据。方法：临床分离的78份菌株分别用4种方法进行ESBLs及耐药性的检测，比较其检出率及差异性。结果：单纸片加克拉维酸扩散法敏感性最好。肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌产ESBLs的阳性率在我院明显高出许多报道。结论：在仪器自动鉴定时，若ESBLs阳性的标本，应采取纸片法重新检测。我院肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌产ESBLs的阳性率应引起医务人员的重视，临床应加强监测，依据药敏情况合理选用抗生素。
［关键词］ 肺炎克雷伯氏菌；大肠埃希氏菌；β内酰胺酶；药敏试验
Detection and Clinical Significance of Two Bacteria with ESBLs
WU Kai
(Luohu Region Hospital of Traditional Chinese Medicine，Shenzhen, Guangdong 518001，China)
Abstract：Objective To screening sensitive test to detesting on ESBLs of Klebsiella pneumonia(KL.pneumonia )and E scherichia(E.coli)，study relation between ESBLs and resistance to antibiotics of KL.pneumonia and E.coli，provide suggestions empirical treatment against the bacteria.Methods 78 strains of KL pneumonia and E.coli were analyzed for ESBLsproducing and antibacterial susceptibility test by four means respectively，compared their positive rate defference.Results singledisc diffusion method with clavulanic acidmost sensitive.positive rate of KL.pneumonia and E.coli in my hospital are higher than others reports.Conclusions when strains were examine produce ESBLs byautomatic bacterial identification analyzer，they should be confirm by singledisc test.positive rate of ESBLspruducing KL.pneumonia and E.coli were so high at our hospital.we should be pay moreattention to monitoring and the antibiotics should be rationally administrated according to drug sensitivity.
Key words：Klebsiella pneumonia(KL.pneumonia)；E scherichia(E.coli)；Extendedspectrum βlactamase(ESBLs)；Antimicrobial susceptibility test
肺炎克雷伯氏菌及大肠杆菌是机体感染率很高的革兰阴性杆菌。由于β内酰胺类的抗生素的广泛应用及不合理使用，使其耐药菌株迅速增加，国内已有较多报道。耐药菌株产生的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)能水解几乎所有的β内酰胺类和单酰胺类抗生素，给临床带来极大困难。β内酰胺酶可通过多种形式进行耐药性的扩散［1］，易造成严重的院内感染［2］，因此对产ESBLs的菌株的检测显得极为重要。肺炎克雷伯氏菌及大肠杆菌是产ESBLs的高危菌株，本文用MicroScan自动微生物分析系统及纸片扩散法、浓度梯度法对其进行比较，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
78株标本均来自我院临床送检的培养检出的细菌(痰、尿液、引流液、分泌物等)，质控菌为肺炎克雷伯氏菌ATCC700603，大肠杆菌ATCC25922，药敏纸片及培养基由DADEBahring公司提供。
1.2 菌种的鉴定
标本分离纯培养后，用自动微生物鉴定系统MicroScan autoSCAN4进行鉴定，鉴定值>0.98的菌株备用。
1.3 单纸片加舒巴坦扩散法
用CAZ(头孢他啶)、CTX(头孢噻肟)、AZT(氨曲南)纸片，滴加12 μg舒巴坦与不滴加的同时作单扩散药敏试验，孵育24 h，加舒巴坦与不加舒巴坦的抑菌环直径之差>5 mm，即为ESBLs阳性。
1.4 单纸片加克拉维酸扩散法
方法同单纸片加舒巴坦扩散法，滴加的抑制剂为克拉维酸，量相同。
1.5 Etest法
方法按说明书严格操作，结果判定：CAZ与CAZ+克拉维酸的刻度值的比值>5为ESBLs阳性，<5为产ESBLs阴性。
1.6 仪器自动检测
(自动微生物鉴定系统MicroScan autoSCAN4)，药敏结果(包括ESBLs的结果)随菌种鉴定结果同出。
2 结果
2.1 鉴定仪自动检测的耐药情况
见表1。表1 鉴定仪自动检测的耐药情况抗生素肺炎克雷伯氏菌(略)注：S(敏感)；M/I(中敏/中介度)；R(耐药)；R%(耐药的百分比)
2.2 32例肺炎克雷伯氏菌ESBLs的检测情况
见表2。表2 肺炎克霉伯氏菌ESBLs方法 （略）
1.3 46例大肠杆菌ESBLs的检测情况
见表3。表3 大肠杆菌ESBLs的检测情况方法（略）
1.4 产ESBLs菌株的耐药情况(鉴定仪检出) 见表4。表4 产ESBLs菌株的耐药情况(略)
结果显示，肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌产ESBLs的阳性率分别为28.1%和45.6%；三种方法的ESBLs的阳性检出率几乎吻合，但仪器自动检测率较低；β内酰氨类的耐药大部分来自ESBLs的阳性菌株。
3 讨论
目前，检测ESBLs的方法较多，本文所采用的方法是许多推荐的较为敏感的检测方法［3］，从本文看出，仪器自动检测的敏感性较差，其他方法检出率较高，单纸片加克拉维酸扩散法敏感性最好。
耐药菌株产生的ESBLs主要是TEM类和SHV类，目前发现的已越来越多。此类产ESBLs的耐药菌株主要为肠杆菌科，尤其以肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌为多。
通过2年多的检测，ESBLs在我院的总检出率已高达38.4%，远高于目前某些文献的报道。由于产ESBLs菌株不断增多，耐药菌株有逐年上升的趋势，应加强院内的监测，及时隔离以防止耐药菌株的扩散，临床微生物实验室应把ESBLs作为常规项目检测。NCCLS建议：临床微生物实验室应报告所有产ESBLs菌株对青霉素类、头孢类抗生素和氨曲南耐药情况。结果显示：亚胺培南对肺炎克雷伯氏菌和大肠杆菌抗菌作用最强，可作为产ESBLs菌株感染的首选药。
在日常工作中，正确而简便的筛选药物为头孢噻肟和头孢吡肟，在检测中，若此两种药物的敏感性变差，则最有可能产生了ESBLs，可以不做纸片法确证试验，直接将结果报给临床，而出现头孢唑林中敏或耐药则更加肯定了此酶的产生，且说明感染比较严重；如博拿出现耐药，则必须做纸片法确证试验，否则出现假阳性。我院目前肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌产ESBLs的阳性率比文献报道要高，应引起医务人员的足够重视，采取措施，及时送检，合理用药。
参考文献：
［1］孔庆莲,于秀娟,姚苹.产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯氏菌的检测［J］.中华医学检验杂志，2000，23：360363.
［2］Wiener J，Quinn JP，Bradford PA，et al.Multiple antibioticresistant Klebsiella and Escherichia coli in nursing homes［Ｊ］.JAMA，1999，281：517523.
［3］倪语星，毛向群，王志军.质粒介导的超广谱β内酰胺酶的耐药性问题及检测［J］.中华医学检验杂志，1999，22增刊：1921.
