高血压患者血清AT1受体及αl受体的自身抗体检测

【摘要】  目的：建立抗血管紧张素Ⅱ 1型受体（AT1）抗体及αl肾上腺素受体抗体的检测方法，并评价其与不同类型高血压的关系。方法：以合成的AT1受体及αl受体细胞外第二环功能表位肽段为抗原，采用间接ELISA法检测150例健康者、92例轻中度原发性高血压患者以及85例原发性高血压合并肾损害患者的血清中AT1受体和αl受体及其抗体。结果：正常对照组、轻中度原发性高血压组、原发性高血压合并肾损害组血清中检测出AT1受体及α1受体的自身抗体分别为9.33%和7.33%、10.87%和9.78%、30.59%和24.71%。高血压合并肾损害组与对照组、轻中度原发性高血压组比较，差异有显著性(P<0.01)。结论：AT1受体及αl受体的自身抗体可能参与了不同类型的高血压恶性阶段的发生和。

【关键词】  高血压病；αl肾上腺素受体；血管紧张素Ⅱ1型受体；自身抗体

　　近年来在高血压患者的血清中发现了AT1受体及αl受体的自身抗体［1～3］。为了探讨其在高血压发病机制中的作用,我们在不同类型的高血压患者中进行了AT1受体及αl受体的自身抗体的检测。

　　1  对象与方法

　　1．1  对象  分组:对照组150例为本院血压正常的职工，轻度原发性高血压组92例、原发性高血压合并肾损害组85例为我院门诊及住院患者。各组年龄、性别、体重等资料比较差异无统计学意义，所有的高血压患者常规服用降压药物。采集受检者清晨空腹血5 ml,离心后血浆贮存于-20 ℃备用；诊断标准：原发性高血压的诊断参照世界卫生组织ISH1999高血压防治指南［4］。肾损害以出现蛋白尿或者血肌酐升高（Cr＞106 umol/L）为准。

　　1.2  方法

　　1.2.1  多肽抗原制备和纯度分析  按照人AT1受体及αl受体细胞外第二环功能表位肽段(AT1-165~191和αl-192~218)氨基酸序列。αl体肽段氨基酸序列为Gly-Trp-Lys-Glu-Pro-Val-Pro-Pro-Asp-Glu-Arg-Phe-Cys-Gly-Ile-Thr-Glu-Glu-Ala-Gly-Tyr-Ala-Val-Phe-Ser-Ser-Val(A1受体192位～218位氨基酸残基);AT1受体肽段氨基酸序列为His-Trp-Ile-His-Arg-Asn-Val-Phe-Phe-Ile-Glu-Asn-Ile-Thr-Val-Cys-Ala-Phe-His-Tyr-Glu-Ser-Gln-Asn-Ser-Thr-Leu(AT1受体165位～191位氨基酸残基)［5］。采用固相多肽合成法合成肽。

　　1.2.2  抗体的ELISA检测  将合成的AT1受体及αl受体特异性抗原多肽,溶解于0.05 mmol/L pH 9.6碳酸盐缓冲液中,包被于微量滴定板上,每孔终浓度为1 ug,4 ℃吸附18 h;加入PTM溶液:磷酸盐缓冲液中加入10%小牛血清,进行空位点封闭,4 ℃过夜,吸出封闭液,拍干,在干燥环境下4 ℃保存备用;血清标本按1∶40用PTM溶液稀释,每孔加入100 μl,置37 ℃ 45 min;AT1受体按1∶2 000,αl受体按1∶2 000加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG,每孔100 μl,置37 ℃ 30 min;加入底物四甲基联苯胺置37 ℃，显色10 min,每孔加2 mol/L盐酸50 μl终止反应,在酶标仪450 nm测吸光度(A)值。

　　1.3  结果判定  抗体定性判断以(标本A值—空白对照A值)/(阴性对照A值—空白对照A值),P/N＞2.1为阳性。

　　1.4  统计学处理  采用χ2检验。

　　2  结果

　　表1  不同组别的AT1及αl受体自身抗体检出率例(略)

　　正常对照组AT1受体及αl受体自身抗体阳性率分别为9.33%和7.33%，轻度高血压组阳性率分别为10.87%和9.78%，略高于正常对照组，但无统计学意义（P＞0.05），而高血压合并肾损害组阳性率分别为30.59%和24.71%，明显高于前两组，并且有统计学意义（P<0.01）。此结果提示AT1及αl受体自身抗体与高血压病有关,该自身抗体可能参与了高血压的发病。

　　3  讨论
　　
　　高血压与自身免疫发病机制是近年来受到关注的问题。在妊娠高血压、恶性高血压患者中发现AT1及αl受体自身抗体,这些抗体可能是妊娠高血压、恶性高血压发病的重要因素。AT1及αl受体自身抗体具有受体激动剂样作用,提示自身免疫反应在高血压的发病机制中具有重要意义［6］。本研究显示,AT1及αl受体自身抗体在高血压病,尤其是合并肾损害患者中有较高的检出率,提示AT1及αl受体自身抗体可能参与高血压病的发生与进程。开展AT1及αl受体自身抗体的临床检测,不仅有助于寻找高血压的发病因素,还有助于指导高血压的药物选择,具有较好的临床应用前景。

【】
  　　［1］ Iao YH,Wei YM,Wang M,et al.Effects of auto antibodies against AT1-receptor and angiotensinⅡon refractory hypertension［J］.South China J Cardiol,2001,1:84?88.

　　［2］ U ML,Herlitz H,Wallukat G,et al.Non-desensitized positive chronotropic effect of anti-angiotensionⅡreceptor autoantibodies in patient with malignant hypertension［J］.Circulation,1996,94:4046.

　　［3］ Wallukat G,Homuth V,Fischer T,et al.Patients with preeclampsia develop agonistic antibodies against the angiotension AT1 receptor［J］.J Clin Invest,1999,11(03):945?952.

　　［4］ Guidelines subcommittee.1999 World Health Organization international Society of Hypertension Guidelines for the management of Hypertension［J］.J Hypertens，1999,17:151?181.

　　［5］ Matsui S,Fu M L,Katsuda S,et al.Peptides derived from cardiovascular G-protein-coupled receptors induce morphological cardiomyopathic changes in immunized rabbits［J］.J Mol Cell Cardiol,1997,29:641?655.

　　［6］ Fu ML,Herlitz H,Wallukat G,et al.Functional auto immune epitope on alpha 1-adrenergic receptors in patients with malignant hypertension［J］.Lancet,1994,344：660?663.