活体组织HE制片程序探讨

【摘要】  目的：为了提高病理HE制片质量，探讨和分析HE制片的各步骤。方法：通过组织的固定、脱水、包埋、切片、染片、封片等一系列的各步骤进行各种实验和比较，提出各步的要点，使每个HE制片的操作者能获得一套标准而稳定的HE制片方法。结果：出该程序方法容易操作。结论：制出的HE切片质量完全能满足诊断和科研的要求，制出的HE切片质量好，稳定。

【关键词】  组织；HE制片；程序；方法

　　The HE Section Procedure and Problemsin Blopsy

　　Abstract：Objective To improve the quality of HE section and analyze the detaile procedures of HE section．Methods： Some key points and notes of each step in HE section were raised through experiments and compariso of the detailed procedures of HE section in Cluding tissue，dehydration，embedding， slice， stain， sealing． Every manipulator of HE section would have access to a suit of Standard and steady methods of HE section． Results The protocl is handy and easy to manipulate． Conclusion HE section according the protocol has high quality and steady，meet the need of pathological diagnosis and Scientific research.

　　Key words：Tissue;HE section;Procedure;Methods

　　HE制片是病理实验室最基本的方法，是各种制片技术最基础的一环［1］。它包括组织固定、脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明和封固等程序。HE染色是既基本又是十分重要的工作。HE染色的好坏直接影响病理医生的正确诊断和科研结果观察，而HE染色质量好坏与HE制片的每一步骤关系都十分密切。只要有某一步骤出问题都直接影响下一步工作，最终导致HE染色质量差，下面对组织的HE制片程序及每一环节的注意事项作分析和探讨。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料  中山一院手术切除活体组织和活检组织以及科研实验的动物组织。德国平推滑动式和轮转式切片机，英国全封闭脱水机脱水。

　　1．2  组织固定  无论取人体组织或动物组织，当它离开本体，都必须投入固定刑。组织固定是利用某些化学试剂(如甲醛、乙醇、氯化汞等)的化学特性，使组织与细胞内的蛋白质发生分子间交联或对蛋白质沉淀作用，从而使蛋白质凝聚、沉淀和变性为不溶性。

　　固定剂简单固定剂(甲醛、乙醇、醋酸等)

　　混合固定剂10%中性甲醛液：甲醛100 ml、蒸馏水900 ml、碳酸钙加至饱和取上清液。

　　10%缓冲中性甲醛液100 ml、Na2HPO4 6.5 g、Na2H2PO4.HO24 g、蒸馏水900 ml(A?F)乙醇?甲醛液。

　　Bouin、Zenker氏液等。

　　表1  各种固定试剂的特性（略）

　　目前各病理室最常用为10%中性甲醛液、10%中性缓冲甲醛液。一般小块组织固定时间为6 h～12 h。

　　1.3  组织脱水、透明、浸蜡可分为人工操作和机械操作  人工脱水10%中性甲醛2 h—80%酒精1 h—95%酒精过夜—无水酒精Ⅰ1 h—无水酒精Ⅱ1 h—无水酒精+丙酮（4∶1）30 min—二甲苯Ⅰ30 min—二甲苯Ⅱ30 min—石蜡65 ℃ 2 h～3 h。

　　注意事项：脂肪组织在脱水过程中虽然经过各级脂溶剂，但由于时间短组织内脂肪不能完全溶解，导致浸蜡不彻底，不能制成优质切片。因此在脱水前应用丙酮脱脂肪30 min～60 min；遇到骨髓或钙化组织应进行脱钙处理：如用14%硝酸或蚁酸等；用脱水机脱水时，应经常检查脱水机内的液体是否符合标准，不应过多或过少，定期更换试剂，蜡缸是否处于溶液状态；如果是完全封闭脱水机还应检查清洗是否彻底，装废汽液瓶的液体是否已装满等；组织包埋时，注意把最平的切片向下，襄性组织、皮肤组织要竖埋；开包埋机时注意溶蜡箱是否有蜡等。