胃癌eIF4E和cyclin D1表达及其临床病理意义
【摘要】 目的 研究真核细胞起始因子4E（eIF4E）及cyclin D1在胃癌中的表达及临床意义，探讨eIF4E与cyclin D1之间的相关性。方法 应用免疫组化的方法检测91例胃癌及30例正常胃组织中eIF4E及cyclinD1的表达。结果 eIF4E、cyclin D1在正常胃组织中均为阴性表达，在胃癌组织中的阳性表达率分别为95.6%（87/91）和84.6%（77/91）。eIF4E及cyclin D1表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移以及临床分期有关（P<0.05），但与肿瘤组织学分化程度、年龄、性别无关。胃癌组织中eIF4E与cyclin D1表达密切相关（P<0.05）。结论 检测eIF4E和cyclin D1表达水平，对于判断胃癌的恶性程度有重要意义。
【关键词】 胃癌 真核细胞起始因子4E cyclin D1
0 引言
真核细胞起始因子4E（eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E）是mRNA帽结合磷蛋白，是蛋白合成的限速因子。有研究表明，eIF4E表达水平在一些人类肿瘤组织和肿瘤细胞株中显著升高[1]。细胞周期素D1（cyclin D1）可通过与细胞周期素依赖激酶4（CDK4）结合形成复合物加快细胞由G1期进入S期，正调节细胞增殖周期，并在包括胃癌在内的多种肿瘤中表达增高[2]。本研究采用免疫组织化学方法检测eIF4E和cyclin D1在胃癌组织中的表达，旨在探讨二者与胃癌临床生物学行为的相关性。
1 资料与方法
1.1 临床资料
收集2002年10月～2004年10月我院及湖北省肿瘤手术切除并经病证实的胃癌组织标本91例，男61例，女30例，年龄32～76岁，平均年龄51.2岁。按胃癌协作组制定的有关胃癌大体分型、组织学分型和临床病理分期等规范进行严格的病理诊断来判断肿瘤转移情况；91例胃癌石蜡包埋标本中，高分化腺癌31例，中分化18例，低分化39例，未分化3例；侵犯浆膜者58例，未侵犯浆膜者33例；有淋巴结转移53例，无淋巴结转移38例；TNM分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期22例，Ⅲ期45例，Ⅳ期10例。所有患者术前均未接受化疗和放疗。另选择同期胃镜及活检组织学正常的胃粘膜标本30例作为研究对照。所有标本经合理取材后用10%中性福尔马林溶液固定，经梯度酒精脱水后浸入二甲苯中，常规石蜡包埋，制成厚5μm的组织切片。
1.2 试剂和方法
鼠抗人eIF4E单克隆抗体、 鼠抗人cyclin D1单克隆抗体均为Santa Cruz公司产品。 免疫组化二步法试剂盒为Antibody Diagnostic公司产品。 DAB显色试剂盒购于北京中山生物技术有限公司。 免疫组化染色程序严格按试剂盒说明书操作。 eIF4E抗体及cyclin D1抗体的工作浓度均为1∶200，染色时均需微波修复抗原。实验中采用PBS代替一抗作为阴性对照，光镜下观察阳性反应呈棕黄色。
表1 胃癌组织中eIF4E和cyclin D1的表达与临床病理特征的关系（略）
1.3 结果判定
eIF4E阳性细胞为细胞浆深染成棕黄色颗粒，cyclin D1阳性细胞为细胞核深染成棕黄色颗粒；在此基础上，参照判断标准[3,4]，以阳性细胞数＜10%为阴性表达，阳性细胞数≥10%为阳性表达。
1.4 统计学处理
采用SPSS11.0统计软件包进行分析。计数资料用χ2检验和四格表确切概率法以及计数资料的相关性分析。以P<0.05为显著性检验水准。
2 结果
2.1 胃癌组织中eIF4E表达
eIF4E阳性染色主要见于胃癌细胞的胞浆，棕黄色颗粒弥漫分布整个胞浆或沿核膜周边分布(见图1～4）。91例胃癌组织中，87例eIF4E表达呈阳性，阳性表达率为95.6%；而30例正常胃组织中无1例阳性表达；两者相比差异有显著性（P<0.01）eIF4E阳性表达与患者年龄、性别以及肿瘤分化程度均无明显相关性（P>0.05），而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有关（P<0.05）, 见表1。
2.2 胃癌组织中cyclin D1表达
cyclin D1阳性染色主要见于胃癌细胞的胞核。在检测的91例胃癌中cyclin D1阳性表达者达77例，阳性表达率为84.6%；而30例正常胃粘膜组织中均未见阳性表达；二者差异有显著性（P<0.01）。cyclin D1阳性表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有关（P<0.05），而与患者年龄、性别以及肿瘤分化程度均无明显相关性（P>0.05），见表1。
2.3 胃癌组织中eIF4E与cyclin D1表达的关系
对胃癌组织中eIF4E与cyclin D1表达水平进行相关性分析，eIF4E阳性表达的87例胃癌中，77例cyclin D1阳性表达；eIF4E阴性表达的4例胃癌中无1例阳性表达，表明cyclin D1与eIF4E表达呈非常显著正相关（P<0.01，r=0.780），见表2。
表2 胃癌中cyclin D1与eIF4E表达的关系（略）
3 讨论
eIF4E基因是近年来发现的又一重要原癌基因，其编码25kD的蛋白eIF4E，是eIF4F复合体（eIF4E、eIF4A、eIF4G）的一部分，可特异性地与真核细胞mRNA的5’末端帽结构结合，参与mRNA的翻译，在帽依赖的翻译起始阶段起限制调控作用[5]。eIF4E的过度表达不仅能促进细胞的增殖反应，而且更能促进细胞的恶性转化[6]。近年来研究发现，eIF4E过度表达与恶性肿瘤的发生及有关。Norton等[1]在人乳腺癌中发现eIF4E 的过度表达，且不存在于乳房良性组织。Liang等[7]报道喉鳞癌中检测到eIF4E过度表达，而正常组织无eIF4E过度表达。本研究发现，胃癌中有95.6%的标本有eIF4E的阳性表达，而正常胃组织中无1例阳性表达，两者相比差异有显著性（P<0.01），且eIF4E阳性表达率与肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有关（P<0.05）。提示eIF4E基因表达上调与胃癌的形成密切相关，并随着本病恶化程度的增加而持续增加，其表达水平对评价胃癌的恶性程度有一定价值。这与其他学者在喉癌中研究的结论相似[3]。
cyclin D1基因是一种细胞周期相关的原癌基因，为正调控子，位于11q13号染色体上，长度约120kb，含有5个外显子，编码由295个氨基酸组成的蛋白质cyclin D1，其分子量为34KD。cyclin D1可与细胞周期素依赖激酶4（CDK4）在G1期结合形成复合物，再通过N末端的LECXE基序与视网膜母细胞瘤（Rb）编码蛋白pRb结合，使pRb的Ser和Tyr残基磷酸化，释放出转录因子E2F，驱动细胞由G1期进入S期，促进细胞增殖。而当cyclin D1表达失控时，则将引起细胞增殖失调，进而导致肿瘤形成[2]。从本研究结果来看，胃癌中cyclin D1阳性表达率为84.6%，而正常胃组织中均未见阳性表达，同时随着胃癌浸润深度的增加、有淋巴结转移以及TNM分期愈晚者cyclin D1表达水平明显升高，表明cyclin D1可能参与促进胃粘膜细胞恶性转化，其过度表达预示肿瘤有较高的侵袭性、容易发生转移和不良预后。
目前认为，eIF4E能使一些肿瘤恶性相关基因的表达量发生变化，是肿瘤恶性表型产生的决定子；通过调节一些特异的恶性相关分子（如cyclin D1、c?myc、VEGF等）的翻译表达量，促使细胞跃过正常生长限制而发生癌变[8]。本研究通过检测eIF4E与cyclin D1在胃癌中表达，分析它们之间的相关性，结果发现eIF4E与cyclin D1呈非常显著正相关，提示胃癌中eIF4E高表达可能导致cyclin D1表达水平增高。由此可见，在胃癌发生发展过程中eIF4E不仅对cyclin D1表达可能起调控作用，而且它们也是预测胃癌恶性程度的重要生物学指标，有助于指导临床方案的选择。
（本文图见封3）（略）
【】
［1］ Norton KS, McClusky D, Sen S, et al. LK1B is elevated with eIF4E overexpression in breast cancer[J]. J Surg Res, 2004, 116(1): 98?103.
［２］ Gao P, Zhou GY, Liu Y, et al. Alteration of cyclin D1 in gastric carcinoma and its clinicopathologic significance[J]. World J Gastroenterol, 2004,10(20): 2936?2939.
［３］ Nathan CA, Sanders K, Abreo FW, et al. Correlation of p53 and the proto-oncogene eIF4E in larynx cancers: prognostic implications[J]. Cancer Res, 2000, 60 (13): 3599?3604.
［４］ Lan J, Xiong YY, Lin YX, et al. Helicobacter pylori infection generated gastric cancer through p53?Rb tumor?suppressor system mutation and telomerase reactivation[J]. World J Gastroenterol, 2003, 9(1): 54?58.
［５］ Graff JR, Zimmer SG. Translational control and metastatic progression: enhanced activity of the mRNA cap?binding protein eIF?4E selectively enhances translation of metastasis-related mRNAs[J]. Clin Exp Metastasis, 2003, 20(3): 265?273.
［６］ Rosenwald IB. The role of translation in neoplastic transformation from a pathologist's point of view[J]. Oncogene, 2004, 23(18): 3230?3247.
［７］ Liang Z, Lei T, LuYing Z, et al. The expression of proto?oncogene eIF4E in laryngeal squamous cell carcinoma[J]. Laryngoscope, 2003, 113(7): 1238?1243.
［８］ De Benedetti A, Graff JR. eIF-4E expression and its role in malignancies and metastases[J]. Oncogene, 2004, 23(18): 3189?3199.
