PTEN和survivin在乳腺癌中的表达及其临床意义
作者：陆云飞 李梦阳 曾健 林进令
【关键词】 乳腺癌
The Clinical Significance and Expression of PTEN, survivin in Breast Cance
Abstract：Objective To study the expression of PTEN, survivin and their clinical significance. Methods The expression of PTEN, survivin, PCNA was evaluated in 60 cases paraffin embedded of breast cancer and 36 cases of mammary gland hyperplasia by immunohistochemical technique(SP), labeling index (PI) of PCNA was acted as a marker of the cellular proliferating activity. Clinicopathologic elements were analyzed by chi square test(χ2) and t?test. Results The expression rate of PTEN was lower in breast cancer patients than that of mammary gland hyperplasia (P<0.05).There was a correlation between the expression of PTEN and the cellular proliferating activity in breast cancer（P<0.05）. The expression of PTEN was significantly inversely correlated with axillary lymph node metastasis, as well as distant metastasis（P<0.05）, and the expression of PTEN was positively correlated with ER and patients’ survival rate（P<0.05）. The positive rate of survivin expression in breast cancer was higher than that of mammary gland hyperplasia (P<0.05), and the expression of survivin was positively correlated with the cellular proliferating activity in breast cancer（P<0.05）. There was a inversely correlation between the expression of PTEN and survivin in breast cancer（P<0.05）. Conclusion The expression of PTEN and survivin is correlated with the cellular proliferating activity in breast cancer. PTEN might be used as a marker in the prognostication of breast cancer. The expression of PTEN was inversely correlated with survivin.
Key words：PTEN；survivin；PCNA；Breast cancer
摘要：目的 研究PTEN和survivin在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌细胞增殖活性的相关性，并探讨其与临床病理的关系。方法 用免疫组化方法(SP法)对60例乳腺癌和36例乳腺增生症的石蜡包埋标本进行PTEN 、survivin、 PCNA检测，其中PCNA指数作为衡量乳腺癌细胞增殖活性的参数。结合病人的临床病理资料进行χ2 检验和t检验。结果 PTEN在乳腺癌中的高表达率明显低于乳腺小叶增生（P<0.05）；PTEN的表达与乳腺癌细胞增殖活性显著相关（P<0.05）；PTEN的表达水平与腋淋巴结转移和远处转移呈负相关（P<0.05），与ＥＲ水平和5年生存率呈正相关（P<0.05）。survivin在乳腺癌中的阳性表达率明显高于乳腺增生症（P<0.05）；survivin的表达与乳腺癌细胞增殖活性呈正相关（P<0.05）。PTEN和survivin在乳腺癌中的表达呈负相关（P<0.05）。结论 PTEN和survivin的表达与乳腺癌细胞增殖活性显著相关； PTEN可以作为一个判断乳腺癌预后的指标；PTEN和survivin可能共同参与了乳腺癌的发生和。
关键词：PTEN；survivin；PCNA；乳腺癌
0 引言
近年来研究表明survivin与肿瘤的发生、发展密切相关。PTEN和survivin 与细胞增殖、凋亡密切相关。目前关于PTEN和survivin的表达与乳腺癌的关系研究较少，在乳腺癌中PTEN和survivin的关系目前国内尚未见报道。为研究PTEN和survivin在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌细胞增殖活性的关系，并探讨其临床意义，我们进行了以下研究，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 全部病例来自1992～1995年本院外科住院乳腺疾病患者,均经组织病确诊。乳腺癌组60例, 均为女性，年龄32～75岁，中位年龄46岁。临床分期：Ⅰ期16 例，Ⅱ期25 例， Ⅲ期17 例，Ⅳ期2 例,其中浸润性导管癌39例，单纯癌12例，髓样癌3例，腺癌6例；良性对照组为同期手术的36例乳腺增生症。
1.2 主要试剂 PTEN、PCNA单克隆抗体、survivin多克隆抗体、SP免疫组化染色试剂盒、DAB试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。
1.3 实验方法 石蜡标本连续切片4张，一张行常规HE染色，另三张分别行PTEN、survivin和PCNA的免疫组化染色，其中PCNA作为衡量乳腺癌细胞增殖活性的指标。免疫组化检测按链霉菌抗生物素蛋白?过氧化酶(Streptavidin?Peroxidase,S?P)法操作常规进行。设立阳性对照和阴性对照，以试剂盒自带的阳性片免疫组化染色结果为阳性对照，以PBS替代第一抗体的乳腺癌组织免疫组化染色结果为阴性对照。
1.4 结果判断 PTEN、survivin阳性表达的判断标准为:染色阳性信号位于细胞浆, 呈棕黄色颗粒，细胞染色强度明显高于背景呈棕黄色者为阳性细胞，见图1、2。参照标准[1, 2]，每张切片检测5个视野(×400),阳性细胞数<10%为(?),10%～50%为(+),>50%为(++),在统计分析时，将ＰＴＥＮ(?)、(+)归入低表达组,ＰＴＥＮ(++)归为高表达组。PCNA染色以胞核染成棕黄色为阳性，见图3。增殖活性以PCNA标记指数(PCNA?LI)代表,随机计数500个细胞中阳性细胞数,PCNA?LI=(阳性细胞数/计数的细胞总数)×100%。
1.5 统计学方法 运用SPSS软件进行ｔ检验和χ2检验，P<0.05差异有显著性。
2 结果
2.1 PTEN基因的表达 PTEN在乳腺癌和乳腺增生症的表达结果：乳腺癌组织中PTEN的高表达率明显低于乳腺增生症组织,两者比较差异有显著性意义(P<0.05)，见表1。
表1 PTEN基因在乳腺癌和乳腺增生症组织中的表达（略）
PTEN表达与乳腺癌临床病理特征的关系：PTEN表达与肿瘤大小、临床分期、病理组织学分级、PR无相关性，ＰＴＥＮ表达水平与乳腺癌组织ＥＲ水平呈正相关(P<0.05), 与5年生存率呈正相关（P<0.05）,与腋淋巴结转移呈负相关(P<0.05)，与远处转移呈负相关(P<0.05)。
PTEN表达与乳腺癌细胞增殖的关系，见表2。
表2 PTEN表达与乳腺癌细胞增殖的关系（略）
2.2 survivin基因的表达 survivin在乳腺癌和乳腺增生症的表达结果：乳腺癌组织中survivin的阳性表达率明显高于乳腺增生症组织,两者比较差异有显著性意义，见表3。
表3 survivin在乳腺癌和乳腺增生症组织中的表达（略）
survivin表达与乳腺癌临床病理特征的关系：survivin的表达与肿瘤大小、临床分期、肿瘤组织学分级、淋巴结转移、ＥＲ状况、远处转移和5年生存率均无明显关系（P>0.05）。
survivin表达与乳腺癌细胞增殖的关系,见表4。
表4 survivin表达与乳腺癌细胞增殖的关系（略）
2.3 乳腺癌中 PTEN和survivin表达的相关性 PTEN低表达组的survivin阳性表达明显高于PTEN高表达组(P<0.05),说明两者为负相关关系，见表5。
表5 乳腺癌组织中 PTEN和survivin表达的相关性（略）
3 讨论
3.1 PTEN基因在乳腺癌中的表达及其临床意义
PTEN是1997年继p53基因之后发现的人类肿瘤中最常发生突变的抑癌基因。PTEN在乳腺癌中低表达是乳腺癌常见的分子事件。Perren等[3]研究发现PTEN基因在乳腺癌中的缺失率为30%～40%; Depowski等[1]运用免疫组化检测151例乳腺癌PTEN蛋白表达, 发现73例(48%)病人有PTEN表达缺失。本组研究显示， 60例乳腺癌中PTEN低表达率为45%，表明PTEN可能参与乳腺癌的发生和。
PTEN是肿瘤细胞浸润和转移的重要负性调节因子[4]。乳腺癌PTEN蛋白表达与 ER失表达、淋巴结转移密切相关［1］。本组结果表明，PTEN蛋白表达水平与乳腺癌组织ＥＲ水平和5年生存率呈正相关,与腋淋巴结转移和远处转移呈负相关。因此，我们认为乳腺癌PTEN蛋白低表达病例的肿瘤恶性程度较高,易出现浸润和转移，预后不佳，PTEN可以作为一个有用的预后判断指标。
本研究以PCNA指数作为衡量乳腺癌细胞增殖活性的指标。PCNA是一种细胞周期调节蛋白, PCNA指数越大,表明处于Ｓ期的细胞越多,细胞增殖活性越强。报告PCNA的表达与乳腺癌淋巴结转移、肿瘤复发及远处转移呈正相关,与预后呈负相关[5]。我们的研究发现，36例乳腺增生症PCNA表达全部为阴性；60例乳腺癌患者中，PTEN高表达组的PCNA指数为(22.21±15.86)， PTEN低表达组的PCNA指数为(42.41±21.26)；两组差别有显著意义，PTEN表达与PCNA指数呈负相关，说明PTEN表达低的肿瘤细胞具有较高的增殖活性。
3.2 survivin与乳腺癌的关系
survivin是1997年发现的凋亡抑制蛋白(IAP)家族的新成员，是迄今发现最强的凋亡抑制因子[6]。近年来研究提示survivin与肿瘤的发生、发展密切相关[7]。目前有关survivin在乳腺癌组织中的表达及其生物学意义的研究不多。国内仅见个别报告[8]，国外的相关研究很少，结果也有所不同。国内辛榕等[8]报道，乳腺癌组织中survivin阳性表达率为64.9%，其表达与肿瘤细胞增殖和腋窝淋巴结转移有关。本组60例乳腺癌中阳性表达率为76.67%，结果与Tanaka[9]和Nasu[10]相似，survivin的表达与肿瘤大小、临床分期、肿瘤组织学分级、淋巴结转移、ＥＲ状况和远处转移均无显著相关。本组研究还发现，在60例乳腺癌患者中，有腋窝淋巴结转移者30 例，survivin阳性表达率为86.67%; 而无腋窝淋巴结转移者30 例，survivin阳性表达率为66.67% ，有腋窝淋巴结转移者survivin阳性表达率明显高于无腋窝淋巴结转移者，虽然两者之间无显著性差异，但survivin的表达与腋窝淋巴结转移相关的趋势是存在的，有必要对此做大样本的研究。
3.3 PTEN和survivin在乳腺癌表达的相关性
目前的研究已证明,癌基因的致癌作用以及抑癌基因的抑癌作用不仅是某个基因的行为,而是多个基因共同协作的结果。有作者发现在胃癌中PTEN和survivin呈负相关[11]，在乳腺癌中PTEN和survivin的关系目前未见报道。我们的研究表明，PTEN低表达组的survivin阳性表达率明显高于PTEN高表达组(P<0.05),说明两者为负相关关系，我们认为在乳腺癌中PTEN和survivin的表达密切相关，两者可能一起参与了乳腺癌的发生和发展。
（本文图见第298页）（略）
【文献】
［1］ Depowski PL, Rosenthal SI, Ross JS. Loss of expression of the PTEN gene protein product is associated with poor outcome in breast cancer[J]. Mod Pathol, 2001, 14(7):672?676.
[2] 尚杰,王霞,陈玉龙，等. 大肠癌组织中survivin表达与血管生成、细胞增殖的关系[J]. 实用癌症杂志,2003, 18(5):501?502.
[3] Perren A, Weng LP, Boag AH, et al. Immunohistochemical evidence of PTEN expression in primary ductal adenocarcinomas of the breast [J]. Am J Pathol, 1999,155(4):1253?1260.
[4] Tamura M, Gu J, Matsumoto K, et al. Inhibition of cell migration, spreading, and focal adhesion by tumor suppressor PTEN [J]. Science, 1998,280(5369):1614??1617.
[5]Lazarris ACH,Chatzingianni EB, Panoussopoulos D, et al. Proliferating cell nuclear antigen and heat shock protein 70 immunolocalization in invasived ductal breast cancer not other specified[J]. Breast cancer and treatment, 1997,43(1):43?51.
[6]Ambrosini G, Adida C Altieri DC. A novel anti?apoptosis gene, survivin, expressed in cancer and lymphoma[J]. Nat Med, 1997,3(8):917?921.
[7] Lu CD, Altieri DC, Tanigawa N. Expression of a novel antiapoptosis gene, survivin,correlated with tumor cell apoptosis and p53 accumulation in gastric carcinomas[J]. Cancer Res, 1998,58:1808? 1812.
[8] 辛榕,郭德玉,于冬梅,等. 乳腺癌中survivin蛋白的表达和PCNA及腋窝淋巴结转移的关系[J]. 第三军医大学学报,2003,25(8),718?720.
[9] Tanaka K, Iwamoto S, Gon G, et al. Expression of survivin and relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas[J]. Clin Cancer Res, 2000,6(1):127? 134.
[10]Nasu S, Yagihashi A, Izawa A, et al. survivin mRNA expression in patients with breast cancer[J]. Anticancer Res, 2002, 22(3): 1839?1843.
[11]董吉顺，倪灿荣.胃癌中survivin、PTEN、cyclinD1和p53基因的表达及其相关性[J]. 临床与实验病杂志, 2003,19(4):396?400.
