中药在急性肺损伤中抗氧自由基的作用

【摘要】  目的 探讨不同中药在急性肺损伤中的抗氧自由基作用。方法 将实验动物随机分为油酸对照、VC、参脉治疗、葛根素治疗、清开灵治疗5组，每组6只。用检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷光甘肽（GSH）和谷光甘肽过氧化物酶（GSH?PX）来评定氧自由基水平；用肺系数评定急性炎症和肺水肿程度；用右肺尖组织光镜病检查观察炎症浸润程度。结果 肺系数：葛根素注射液组明显高于其他各组（P＜0.01）；MDA：葛根素注射液组、清开灵注射液组明显低于其他3组（P＜0.01 或P＜0.05）；T?SOD：葛根素注射液组明显低于其他组（P＜0.05）；GSH：VC注射液组明显高于其他组（P＜0.05）；GSH?PX：油酸组、葛根素注射液组明显高于其他3组（P＜0.01）。光镜见炎细胞浸润与肺泡充血水肿程度依次为：脉注射液组＜葛根素注射液组＜VC注射液组＜清开灵注射液组＜油酸组。结论 VC、参麦、葛根素、清开灵均是可用的抗氧自由基药物，葛根素和清开灵降低MDA的作用略强于其他药物；葛根素升高T?SOD的作用弱于其他药物，但升高GSH?PX作用较强；损伤后12 h参脉可明显升高GSH?PX。光镜观察损伤后12 h病理变化组间有差异。

【关键词】  中药；急性肺损伤；氧自由基

    Abstract:Objective  To study influence of different Chinese herbal medicine on ALI in acute lungs injure through their function against oxy?radicals. Methods  30 laboratory animals into 5 groups are divided randomly:oleic acid group,Vit C injection(VC) group,Shenmai injection group,Daidzein(puerarin injection) group and Qingkailing injection group.The level of free oxygen radical are evaluated by MDA,SOD,GSH,and GSH?Px.The degree of acute inflammation and edema (lung) were evaluated by lung coefficient.The tissue from apex of right lung was examined and observed under light microscope pathologically to get the  degree of the inflammation. Results  Lung coefficient was obviously different among the groups,the Daidzein(puerarin injection)group obviously higher than any other groups.MDA:the Daidzein(puerarin injection)group and the Qingkailing injection group was obviously lower than the other groups.T?SOD:the Daidzein(puerarin injection) group was obviously lower than the other groups.GSH:the Shenmai injection group was obviously higher than any other groups.GSH? Px:the Oleic acid group and the Shenmai injection group were obviously higher than the other groups,The degree of congestion and edema showed in 12hrs:the Shenmai injection group

    Key words:Chinese herbal medicine; ALI; oxygen free radical

    急性肺损伤（acute lung injury，ALI）是临床常见难治性并发症之一，特别是在重度感染、各种休克、创伤及外科手术后易于并发。探讨早期和选择针对氧自由基造成的二次损伤的中药干预性治疗，对减少病死率和病残率、提高生活质量有很大意义。

    1  材料与方法

    1.1  动物模型制作与分组

    纯种Wistar大鼠（长春农牧大学提供）30只，雌雄不限，体重为（200±50）g，随机分为5组，每组6只：即油酸对照组，VC注射液组，参脉注射液组，葛根素注射液组，清开灵注射液组。

    1.2  实验动物处理

    各组采用一次性大鼠尾静脉注射油酸0.27 ml/kg［1］。治疗组：维生素C注射液0.8 g/kg（安阳九州药业有限责任公司，国药准字H20045773，每2 ml含0.5 g）［2］，用生理盐水配制成2 ml；葛根素注射液30 mg/kg（哈尔滨市三联药业有限公司，国药准字H20033637，每5 ml含0.25g）；参麦注射液2 ml/只（河北省神威药业有限公司，国药准字号Z13020888，每支10 ml）；清开灵注射液30 mg/kg（哈尔滨市三联药业有限公司，国药准字H20033637，每5 ml含0.25 g），用生理盐水配制成2 ml溶液，均腹腔内注射。对照组：用等量生理盐水取代上述药物同样方法给药。实验动物在给药12 h后，1%乌拉坦腹腔麻醉后腹主动脉取血5 ml，离心分离血清，-20℃冰箱保存待检。立即取完整肺组织，称（记录）湿重；用生理盐水20 ml经肺动脉灌洗去血，取右上叶肺组织约10 g，10%福尔马林固定72 h后HE染色，200倍光镜观察其病理变化。

    1.3  检测方法

    MDA、SOD、GSH和GSH?Px均选用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒，分别用硫代巴比妥酸法、亚硝酸盐法、二硫代二硝基苯甲酸法、二硝基苯甲酸法检测。依说明逐步加入试剂及待检标本，最后分别用分光光度计在532 nm、550 nm、420 nm和422 nm处测定其OD 值，用所给公式分别MDA、SOD、GSH和GSH?Px浓度。计算肺系数：（肺湿重/体重）×100。

    1.4  心脏重量参数测定

    数据处理：两样本均数t检验处理所获数据，结果P＜0.01或P＜0.05为有意义。

    2  结  果

    各组损伤后12小时肺系数和血清中MDA、SOD、GSH、GSH?Px比较见表1，由表1可见，肺系数、MDA、T?SOD、GSH、GSH?PX各组间均有明显差异。肺系数：葛根素注射液组明显高于其他各组（P＜0.01）；MDA：葛根素注射液组、清开灵注射液组明显低于其他3组（P＜0.01 或P＜0.05）；T?SOD：葛根素注射液组明显低于其他组（P＜0.05）；GSH：VC注射液组明显高于其他组（P＜0.05）；GSH?PX：油酸组、葛根素注射液组明显高于其他3组（P＜0.01）。

    各组损伤后12小时光镜病理见表2。表1  损伤后12 h各组肺系数和血清中MDA、SOD、GSH、GSH?Px比较

　　3  讨  论

    急性肺损伤时，中性粒细胞在炎性介质和趋化因子作用下，经粘附、移出血管、趋化游走至炎症灶，通过吞噬、脱颗粒和呼吸爆发等反应释放溶酶体酶及氧自由基等一系列代谢产物，在消灭致炎物的同时也损伤肺组织，因此活性氧和氧自由基与肺损伤有密切关系。随着病情的进展，氧自由基可进一步使脂质过氧化，其终产物MDA水平上升，进一步引起蛋白质交联变性、DNA断裂，破坏肺组织结构。有资料表明ALI  表2  各组损伤后12 h 200倍光镜下所见 目前已有大量的研究证实许多抗氧化剂包括维生素类，特别是维生素E和C在肺损伤中有重要的保护作用［4］。维生素C是重要的还原剂，在体内和脱氧抗坏血酸形成可逆的氧化还原系统，在生物氧化及还原过程和细胞呼吸中起重要作用。参与氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白和组织细胞间质的合成，具有降低毛细血管的通透性、刺激凝血功能、增加对感染的抵抗作用及具有解毒功能。从本实验结果看VC具有同参脉、葛根素、清开灵一致的作用，但药物价格却明显低于这些药物，是临床ALI不可缺少的辅助用药。参脉注射液是中药复方，主要成分为人参和麦冬，已有研究报道参麦注射液能降低脂质过氧化，增强机体抗氧化系统的功能［5］ 。本实验在参脉干预后12 h GSH明显增高，与同行研究结果相似。

    葛根素具有升高SOD活力的作用，早期应用葛根素可以有效地清除氧自由基、减轻受损伤细胞的数目，葛根素还能够减轻PMN浸润、减轻肺组织水肿程度，对ALI起到有效的保护作用［6］。本实验ALI时葛根素干预12 h后，MDA明显降低，GSH?PX明显升高，表明葛根素有较好的抗氧自由基作用。但T?SOD在ALI 12 h的水平较其他药物低，可能葛根素升高T?SOD的作用较迟；但损伤后12 h葛根素组肺系数较高尚难于解释。

    清开灵注射液由于具有清热解毒等功效被广泛应用于临床，除抗菌、抗炎、抗病毒外，还可改善血液循环、清除体内自由基等作用［7?8］。本实验中肺系数在损伤后12 h MDA明显降低，表明其抗氧自由基的作用在损伤后12 h为佳，为临床重复给药采取合适的时间间隔提供依据。

    抗氧化系统一般认为分3级［9］：一级抗氧化是阻止氧自由基的形成；二级抗氧化是消除或灭活已经形成的氧自由基，包括使用参麦等；三级抗氧化是修复或消除被氧化损伤的分子。根据氧化应激在肺损伤发病机制中的重要作用，补充外源性抗氧化剂或抗氧化酶，重建机体内氧化与抗氧化平衡，可以起到治疗肺损伤的作用。从光镜病理炎细胞浸润与肺泡充血水肿程度来看，损伤后12 h的病理损伤由轻到重排序为：参脉注射液组＜葛根素注射液组＜VC注射液组＜清开灵注射液组＜油酸组。本实验结果认为：中药治疗ALI有明显疗效，但实验药物所起作用的时间点有所不同，临床使用时需要注意。

【】
［1］ 陆月玲.油酸致大鼠急性肺损伤动物模型评析［J］.中华急诊医学杂志，2005,14（1）：81?83.

［2］ 施新猷.医用实验动物学［M］.西安：陕西技术出版社,1989：418?421.

［3］ Pacht E R,DeMichele S J,Nelson J L,et al.Enteral nutrition with eicosapentaenoic acid,gamma?linolenic acid,and antioxidants reduces alveolar inflammatory mediators and protein influx in patients with acute respiratory distress syndrome［J］.Crit Care Med,2003,31(2):491?500.

［4］ 黄晓军，王选锭.急性肺损伤抗氧化治疗的研究进展［J］.临床内科杂志，2004，21（10）：652?654.

［5］ 黄翠萍，杨和平，张珍祥.参麦注射液对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤防护机制探讨［J］.中华结核和呼吸杂志，2005，28（1）：67?68.

［6］ 谭明韦，高尔．葛根素对失血性休克家兔急性肺损伤的保护作用［J］.临床药学杂志，2004，13（6）：345?349.

［7］ 李臻，边立荣，曲韵智．清开灵滴丸对家兔感染性退热作用的研究［J］.内蒙古医学杂志，2003，35(2)：103.

［8］ 张春颖，杜贵友，梁日欣，等．清开灵和生脉注射液联合用药对油酸型急性肺损伤家兔的治疗作用［J］.中国中药杂志，2005，30（9）：686?689.

［9］ van der Vliet A,Cross C E.Oxidants,nitrosants,and the lung［J］.Am J Med，2000,109(5):398?421.