吗啡对垂体后叶素致兔心肌损伤的影响

【摘要】  目的 观察吗啡预处理垂体后叶素引起的兔心肌损伤后血压、心电图和血清心肌肌钙蛋白I(cTn-I)的含量变化，并观察心肌病理切片，探讨吗啡对受损心肌预处理的影响。方法 将成年白兔24只随机分为三组，对照假手术组(A组)，手术模型完成稳定45min后予0.9%生理盐水0.2～0.3mL/kg，30s静脉注射完毕；药物损伤心肌组(B组)，45min后予垂体后叶素(2.5U/kg)0.2～0.3mL/kg，30s注射完毕；吗啡预处理组(C组)，予吗啡0.65mg/kg静脉推注，45min后予垂体后叶素(2.5U/kg)0.2～0.3mL/kg，30s注射完毕，记录给药前后平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)、HR及T波变化；测定血清cTn-I含量；观察给药48h后白兔心肌组织的变化。结果 与A组比较，B组MAP、CVP、T波明显升高(P＜0.01)，HR明显下降(P＜0.01)；与B组相比，C组MAP、CVP、T波明显下降(P＜0.01)，T波B、C组明显高于A组(P＜0.01)。血清cTn-I水平A、C组低于B组(P＜0.01)。结论 吗啡预处理对垂体后叶素所致的兔心肌损伤有保护作用。

【关键词】  心肌损伤；吗啡；肌钙蛋白I；双抗夹心免疫吸附法；兔

　　Abstract: Objective  To observe the change of blood pressure,electrocardipgram and Troponin I after morphine pretreatment on acute myoardial infarction induced by pituitrin in rabbits , and to compare them with the change of pathostaining, and to explore the effect of morphine pretreatment on acute myocardial ischemic injury. Methods  Twenty-four rabbits were divided randomly into three groups: control group(Group A), pituitrin group (Group B) and morphine pretreatment group(Group C). The information included MAP、CVP、HR and T wave were observed and recorded at different time points. It was divided into two observing phrases of 24h,48h and determined the contents of blood serum cTn-I and caridiac pathostain of 48h. Results  (1) Changes in myocardiac mechanics:myocardiac mechanics had a dynamic change after injection of pituitrin 2.5U/kg weight. parameters between and within groups throughout the experimental period except ischemia group,which had a significantl reduction in HR and a significant increase in MAP, CVP and T wave. Comared with other groups. Group C compared with Group A , MAP and CVP at each time point there was no significant statistical difference, HR (1min) decreased (P＜0.05),T wave increased(P＜0.01). Compared  B group with group A, MAP (1min) significantly increased (P＜0.01), CVP significantly increased from 15 sec to 5 min (P＜0.01), HR significantly lowered in 15sec to 10 min (P＜0.01),T wave significantly increased(P＜0.01). Compared Group B with C group,HR significantly decreased at the point of from 30sec to 2min (P＜0.01), MAP ,CVP and T wave was no significant statistical difference at differnet time points. (2) Blood serum cTn-I showed significant difference among three groups(P＜0.01).(3)Cardiac pathological change showe significant difference among three groups.Conclusion  Morphine pretreatment can prevent lipid peroxidation and protect myocardium.

　　Key words: myoardial infarction；morphine；troponin I；enzyme linked immunosorbent assay；rabbit

    急性心肌梗死(AMI)是危害人类健康的世界范围性问题，其发病率和死亡率都极高。吗啡作为中枢镇痛和镇静药，具有镇痛、抑制交感神经活性、减轻心脏前后负荷、降低心肌耗氧量的作用，是AMI的常用药。近年来人们发现，吗啡能模拟缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)减少心肌梗死面积，具有心肌保护作用。血清肌钙蛋白I(cTn-I)是目前公认的敏感性较高、特异性最强的反映心肌损伤的指标，血清cTn-I浓度的升高可以反映心肌损伤的严重程度，中华医学会检验分会于2002年明确提出cTn-I取代CK-MB成为检测心肌损伤的金标准。本研究以兔垂体后叶素性心肌损伤为模型，观察并探讨吗啡对受损心肌预处理的影响。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料

　　1．1．1  实验动物

　　中国白兔，雌雄不限，体重(2.00±0.26)kg，由宁夏医学院实验动物中心提供，健康状况符合国家普通实验动物健康标准。

　　1．1．2  实验仪器
 
　　MP20心电监测机(德国产)；HX-300动物呼吸机(XH-300成都泰盟科技有限公司产)；输液泵(PERFUSION COMPACT。B＼BRAUN)；MME-192超低温冰箱(SANYO Electrin biomedical CO，Ltd，ULTRT-low temperation freezer model)；KHB Labsyatems Wellsacanks 酶标仪和洗板机。

　　1．1．3  实验试剂和药物

　　cTn-I试剂盒(酶联免疫吸附测试定量，美国ADL公司)，购自南京铜人生物工程研究所。垂体后叶素(6U/支，上海禾丰制药有限公司生产，批号 5401005)；吗啡(10mg/支，沈阳第一制药厂生产，批号 050703)；维库溴胺注射液(4mg/支，仙居制药有限公司生产，批号 010404)

　　1．2  方法

　　1．2．1  动物模型的制备

　　用2%的戊巴比托钠(45mg/kg)腹腔注射麻醉白兔，将其固定于实验兔专用操作台，将心电图针状电极插入兔4肢皮下，用心电图机描记标准肢体Ⅱ导联心电图；2%盐酸利多卡因表面麻醉兔的鼻腔、会厌、声门开口处，经鼻或经口插管(2.5#，11～13cm)并固定；术野备皮消毒铺单，手术暴露颈总动脉和颈内静脉，用于监测平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)以及给药，待手术操作完成，给予维库溴胺2mg/kg静脉推注，0.9%生理盐水10mL/(kg·h)静脉泵入，用动物呼吸机控制呼吸(8～10mL/kg，40～50次/分)，手术模型完成稳定15～20min后开始记时并进入药物实验。

　　1.2.2  动物分组

　　对照假手术组(A组)，手术模型完成稳定45min后予0.9%生理盐水0.2～0.3mL/kg，30s静脉注射完毕；药物损伤心肌组(B组)，45min后予垂体后叶素(2.5U/kg)0.2～0.3mL/kg，30s注射完毕［1］；吗啡预处理组(C组)，予吗啡0.65mg/kg静脉推注，45min后予垂体后叶素(2.5U/kg)0.2～0.3mL/kg，30s注射完毕。

　　1.2.3  实验观察指标

　　(1)分别检测并记录三组白兔给垂体后叶素即刻、15s，30s，1min、2min、3min、4min、5min、10min和20min的MAP、CVP、HR、T波。(2)分别采取白兔注射垂体后叶素前后24、48h时的全血3mL，3000r/min离心制备血清，-80℃冰箱保存，用于血清cTn-I检测。(3)病理检查。48h后即刻麻醉兔，开胸摘取心脏，切取左心室，用10%甲醛固定后石蜡标本切片，常规HE染色，进行病理组织学检查。

　　1．3  统计学方法

　　使用SPSS 14.0软件进行统计分析。结果用均数±标准差表示。组间比较采用方差分析，均数间两两比较采用q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

　　2．1  各组白兔给药前后血压、心率及T波变化

　　(表1、2、3)表1  各组白兔给药前后血压的变化(略)表2  各组白兔给药前后心率的变化(略)表3  各组白兔给药后T波的变化(略)

    与A组比较，B组MAP、CVP、T波明显升高(P＜0.01)，HR明显下降(P＜0.01)；与B组相比，C组MAP、CVP、T波明显下降(P＜0.01)，T波B、C组明显高于A组(P＜0.01)。

　　2．2  各组白兔血清cTn-I的变化  (表4)表4  三组血清白兔cTn-I的变化(略)
   
　　血清cTn-I水平A、C组低于B组(P＜0.01)。

　　2．3  心肌组织病变化(图1～3，见封3)

　　3  讨论

    目前，建立心肌梗死动物模型的药物常用的是异丙肾上腺素和垂体后叶素，通过药物作用造成冠状动脉痉挛，促使心肌发生梗死。垂体后叶素是下丘脑神经元合成的神经激素，垂体后叶素中含有血管升压素，生理状态下主要通过V2受体调节终尿量，大剂量时通过V1受体引起冠状血管收缩，该模型死亡率相对较低，模型相对稳定。因此在本实验研究中用其诱发心肌缺血。

    近年来，国内外的研究人员从不同的角度研究吗啡取得不少成果。王欣等［2］研究发现，吗啡预处理可以减轻缺血心肌损伤及产生限制心肌梗死范围的心肌保护作用；吗啡是通过心脏局部的阿片受体介导，激活蛋白激酶C从而产生心肌保护作用。江晓菁等［3］研究发现，吗啡可以减轻大鼠心肌的缺血/再灌注损伤；吗啡是通过心肌局部的阿片受体及心肌细胞的KATP通道介导产生心肌保护作用。本研究结果显示心肌梗死模型组白兔注射垂体后叶素后１５s即出现ＨＲ降低，并持续１０min多；ＭＡＰ在１５s即呈上升趋势，２min达高峰并保持５～１０min；ＣＶＰ在１５s即呈上升趋势，１min达高峰并保持约1０min多，２０min后，ＨＲ上升，ＭＡＰ和ＣＶＰ下降基本保持稳定。注射吗啡进行预处理后，再注射垂体后叶素发现，吗啡能明显拮抗垂体后叶素作用和心脏自身代偿作用导致的血流动力学变化以及心脏的损伤。

    该实验表明心肌梗死模型组白兔注射垂体后叶素后即刻II导联心电图T波显著抬高，30s时T波达到最高，30s后心电图出现T波下降但始终高于A组。吗啡的预处理除了对实验兔心率和血压有一定影响外，我们还观察到吗啡的预处理能明显降低S-T段高度，减少心肌梗死发生，并能改善T波的变化。另外本实验研究显示心肌梗死前三组白兔血清cTn-I基本相同，垂体后叶素导致兔心肌损伤后B组cTn-I的水平高于C组和A组，表明吗啡预处理可以减轻心肌损伤程度，减少心肌酶的释放。cTn-I测定是诊断心肌梗死最敏感的指标，可反映微型梗死。正常情况在心肌细胞膜完整的状态下，cTn-I不能透过细胞膜进入血液循环，血液中的cTn-I含量很低，当一些病变引起心肌细胞损伤时则迅速弥散入血液，外周血中90%以上的cTn-I以cTnI-NTnC复合物形式存在，游离的较少。有研究表明，发生急性心肌梗死后，50%的病人血清cTn-I在3～4h后增高，10～24h达到高峰［4］，由于肌纤维逐步降解，肌钙蛋白复合物不断释放，cTn-I能持续升高1周左右［5］。cTn-I具有高度的心肌特异性，作为心肌损伤的特异性标志物在缺血心肌损伤中得到了广泛的应用，近年来国内外都非常重视cTn-I的检测，国外已经将其定位诊断心肌梗死的的金标准。本研究各组白兔在给药后48h的心肌组织病理切片显示，B组兔的心肌损伤程度最重，在心内膜下存在广泛的心肌损伤和梗死，炎症细胞弥漫性侵润；而吗啡预处理组的心肌损伤成灶性，心肌损伤和梗死程度明显较轻。说明吗啡对垂体后叶素引起的心肌损伤有预处理作用。

    综合本次实验结果，可以说明预先注射吗啡对垂体后叶素导致的兔心肌有保护作用，提示吗啡预处理可减轻缺血性的心肌损伤，这为临床心血管病人手术麻醉的合理用药提供了实验依据。

【】
  　［1］苗明三.实验动物和动物实验技术［M］.北京：中医药出版社，1997：6.

　　［2］Wang L，Brown JR，Varki L，et al.Heparin’s anti-inflammatory effects require glucisamine 6-O-sulfate and are mediate by blockade of L-and P-selects［J］. J Clin Inves，2002，110(1)：127-136.　

　　［3］张东吉，曲少春，陈正.不同部位冠状动脉结扎形成实验性心肌梗死模型的探讨［J］.白求恩医科大学学报，1983，9：63-65.

　　［4］Schultz JJ，Hsu AK，Gross GJ.Ischemic preconditioning and morphine-induced cardioprotectection invovlve the delta(δ)-opioid receptor in the intact rat heart［J］. J Mol Cell Cardiol，1997，29：2187-2195.

　　［5］王欣.阿片受体在缺血预处理中的作用［J］.中华胸心血管外科杂志，2001，17(2)：93-95.

　　［6］江晓箐，师恩岏，常业恬，等.吗啡对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用［J］.中华麻醉学杂志，2002，22(9)：559-561.