调脂护肝方对高脂饲养所致脂肪肝大鼠生化指标的影响
作者:陈圣高 张美稀 郑文君
【摘要】 目的 观察调脂护肝方对高脂饲食脂肪肝大鼠的干预效应,探讨其药效学机制。 方法 将雄性SD大鼠64只正常喂养1周后,随机分为正常组12只饲基础饲料,实验组52只给予高脂饲料饲食(含胆固醇2%,猪油10%,基础饲料88%),13周末随机抽取正常组2只、高脂饲养8只,验证高脂饲养大鼠脂肪肝形成。剩余44只随机分为4组即病理模型组、东宝甘泰组、羊栖菜组、调脂护肝方组,每组11只。在继续饲高脂饲料外,分别给予东宝甘泰,按0.5g/(kg·d)(用蒸馏水配成0.05g/ml的混悬液),羊栖菜煎剂按10ml/(kg·d)(10ml含羊栖菜生药20g),调脂护肝方按10ml/(kg·d)(由羊栖菜、丹参、制大黄、葛根、泽泻、茯苓=3:2:1:1:1:1),共8周。第21周末称重,处死动物,取肝脏,肝脂数(肝重/体重×100%),抽血,并检测:血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂白蛋白-胆固醇(HLD-C)、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果 与病理模型组、东宝甘泰组比较调脂护肝方组大鼠体重、肝指数血清TC值、TG值均降低,HLD-C值增高,血清ALT、AST、MDA值均较低,SOD值较高(各组比较P<0.01)。结论 调脂护肝方干预非酒精性脂肪肝的药效机制为:降低体重与肝指数,调整脂质代谢,改善肝功能,抗脂质过氧化。
【关键词】 非酒精性脂肪性肝病 大鼠 中草药 海藻(羊栖菜) 调脂护肝方
【Abstract】Objective To observe theraputic effect of Tiaozhi Hugan decoction treatment and investigate its pharmcodynamic. Methods 64 SD male rats were fed a normal diet for one week then they were randomly divided into two groups ,one was normal group(which were 12 rats)fed normal diet, the other , which were 52 rats fed high fatty diet for 12 weeks. At the end of 13th week, 2 rats from fed normal diet group and 8 rats from fed high fat diet group were scarified to test fatty liver model .Then 44 rats,which were fed high fatty diet,were randomly divided into 4 groups of 11 each:model control group,DongBao GanTai group ,seaweed decoction group and Tiaozhi Hugan decoction group. They were fed high fatty diet continuously for 8 weeks. At the same time model control group rats were given distilled water 10ml/(kg·d) by gastrolavage ,seaweed decoction group rats were fed seaweed decoction 20g/(kg·d).Dongbao Gantai group rats were fed Dong Bao Gantai,0.5g/(kg·d),Tiaozhi Hugan decoction group were fed Tiaozhi Hugan decoction 10ml/(dg·d)(contained seaweed 20g /kg).At the end of 21th week,all rats were scarified,body weight,liver index(liver/body weight ratio)serum triglyceride (TG ), total cholesterol ( TC ),high density lipoprotein-cholesterol, (HLD-C ),alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase,(AST ),superoxide dismutase(SOD) malonyl-dialdehyde (MDA) were assayed . Results Compared with model control group,DongBao Gantai group, the level of body weight,liver index, TC ,TG, ALT,AST in serum in Tiaozhi Hugan decoction group were lower significantly .The level of HLD-C was higher.,the level of MDA in Tiaozhi Hugan decoction was lower significantly, the level of SOD was higher significantly(in all group P<0.01)Conclusion It suggests that the pharmacodynamics mechanisms of Tiaozhi Hugan Decoction to fatty liver induced by high fatty diet are lowering body weight and liver index, adjusting lipometabolism, improving liver function and having anti-lipid peroxidation effects.
【Key words】Non-alcoholic fatty liver disease Rat Chinese herbal medicine Seaweed Sargassum fusiforme(Harv.) TiaoZhiHuGan Decoction
非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease ,NAFLD)是指脂肪、主要是甘油三酯在肝内过度贮积而引起的慢性病理改变,引起NAFLD的主要病因为肥胖,高脂血症,糖尿病或糖耐量异常。由于地域不同,诊断方法有异,我国NAFLD报道成年人发病率约在5.2%~19.2%之间[1,2]。目前对NAFLD的致病因素与致病机制研究不断深入,在防治方法除针对病因采取平衡饮食、适量运动、控制糖尿病与糖耐量异常等原发病外,还采取调血脂、护肝、抗氧化、抗肝纤维化,但一些药物如非那贝特治疗脂肪肝,因为降低血脂可导致肝内脂肪沉积,加重或可导致肝功能异常,他汀类调脂药可导致肝功能损害,而限制了调脂药的使用。其他药物疗效也不十分肯定。中医对一些中药与方剂进行临床与实验研究表明,对改善脂肪肝有作用,相对副作用较少。为进一步明确中医药治疗NAFLD的作用机制,在临床基础上[3],作者于2005年5月20日至10月6日对中药复方调脂护肝方进行动物实验研究。
1 材料与方法
1.1 一般资料
SD雄性大鼠64只,清洁级动物,体重(130±20)g由温州医学院实验动物中心提供,实验室正常喂养1周后,开始造模。动物饲料:大鼠用普通饲料、高脂饲料由温州医学院实验动物中心提供。
1.2 主要药品及试剂
(1)造模药 胆固醇:上海源聚生物科技生产;猪油:市售。(2)治疗药 东宝甘泰片:吉林产;每片含蛋氨酸0.1g,重酒石酸胆碱0.1g,维生素B1 2mg,维生素B2 2mg,维生素B6 2mg,泛酸钙3mg,烟酰胺6mg等。中药饮片及煎剂由本院中药房提供。(3)检验试剂:SOD、MDA试剂盒,购于南京。(4)主要仪器:721型分光光度计(上海分析仪器三厂),东芝TBA-120FR、全自动生化分析仪(日本)。
1.3 方法
(1)实验性高脂大鼠脂肪肝造模:雄性SD大鼠64只,正常喂养1周后随机分为正常组12只,饲基础饲料,实验组52只给予高脂饲料饲食,高脂饲料含胆固醇2%,猪油10%,基础饲料88%,饲食13周末,随机抽取正常组2只,高脂饲料饲养8只,验证高脂饲养大鼠脂肪肝形成;剩余44只高脂饲养大鼠随机分为4组,每组11只(以上各组体重差异无显著性)。继续饲食8周,即病理模型组继续饲养高脂饲料,东宝甘泰组继续饲高脂饲料外给予东宝甘泰混悬液,羊栖菜组继续饲高脂饲料外给予羊栖菜煎剂,调脂护肝方组继续高脂饲料外给予调脂护肝方,于第21周末结束。(2)实验动物用药:正常组10只以蒸馏水灌胃10ml/(kg·d),病理模型组以10ml/(kg·d)蒸馏灌胃,东宝甘泰组以0. 5g/(kg·d)(蒸馏水配成0.05g/ml混悬液)灌胃。羊栖菜组按10 ml/(kg·d)煎剂(10ml含生药20g,大鼠剂量换算相当于成人20倍/kg),调脂护肝方以10ml/(kg·d)(羊栖菜、丹参、制大黄、葛根、泽泻、茯苓=3:2:1:1:1:1),以上各组灌胃共8周。(3)标本采集、制备:实验第21周末结束,大鼠禁食12h称重,以氯氨酮注射液100mg/kg,腹腔麻醉后股动脉取血6~8ml,分离血清用于生化检测。(4)标本检测:血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂白蛋白-胆固醇(HLD-C)、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)检测。血清超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)按试剂说明书进行检测。
1.4 统计学处理
采用SPSS 11.0软件,计量资料采用单因素方差分析,F检验。
2 结果
各组大鼠体重、肝指数变化见表1。与正常组比较虽有所增高,但差异无显著性(P>0.05)。各组大鼠血清TC、TG、HLD-C比较见表2。各组大鼠血清ALT、AST值比较见表3。各组大鼠MDA SOD比较见表4。表1 各组大鼠体重、肝指数的比较(略)注:与正常组比??P<0.01,与病理模型组及东宝甘泰组比##P<0.01,与正常组、羊栖菜组、调脂护肝方组比△△P<0.01表2 各组大鼠血清TC、TG 、HLD-C比较(略)注:与正常组比较?P<0.05,与正常组、调脂护肝方组比较??P<0.01,与正常组比较#P<0.05,与正常组、羊栖菜组、调脂护肝方组比较##P<0.01。与正常组、病理模型组、东宝甘泰组、羊栖菜组比较△△P<0.01。表3 各组大鼠血清ALT、AST比较(略)注:与正常组、调脂护肝方组比??P<0.01,与正常组比##P<0.01, 与羊栖菜组、调脂护肝方组比△△P<0.01, 与调脂护肝方比▲▲P<0.01表4 各组大鼠血清MDA SOD比较(略)注:与正常组比?P<0.05,与正常组比??P<0.01, 与调脂护肝方比##P<0.01 与羊栖菜组比△P<0.05,与羊栖菜组,调脂护肝组比△△P<0.01与调脂护肝方比▲▲P<0.01,与羊栖菜组比※P<0.05, 与羊栖菜组比■P<0.05
3 讨论
肝脏是脂肪代谢的重要器官,当肝细胞TG合成和分泌平衡破坏,脂肪在肝内贮积超过肝重的5%或光镜下1/3以上的肝细胞脂肪变时,形成单纯性脂肪肝,即所谓的初次打击(first hit)。在单纯性脂肪肝的基础上,在肥胖、糖尿病、药物及其他代谢异常因素的持续作用下,通过氧化应激和脂质过氧化途径,导致脂肪变的肝脏发生炎症。因此,减少肝内脂肪沉积和抑制氧化应激和脂质过氧有助于脂肪肝的。其致病机制为过食肥甘,湿浊内生,久而酿痰生热,气机阻滞,瘀血内生,甚至肝、脾、肾虚弱。可见我国历代医家已认识到这些病症的发生演变过程与饮食,环境,精神因素相关,并出一些健脾化湿、清热化痰、理气活血、养肝益肾的方剂如胃苓汤、小柴胡汤、复元活血汤等。海藻(羊栖菜)性味咸寒,归肝肾经,有消痰软坚,利水消肿功效。《本草纲目》记载其能“消除水气浮肿,宿食不消、五膈痰 ”;药实验表明,羊栖菜含羊栖菜多糖A(SFPP)、B(SFPPR)、C(SFPPRR)、羊栖菜多糖(SFRS)、岩藻甾醇(Fuscosferol)粗纤维以及维生素B族,维生素E、D、K等,具有降压、调脂、降血糖、抗凝、免疫调节,抗肿瘤等作用[3]。作者实验观察到羊栖菜对实验性脂肪肝大鼠肝脏脂肪沉积有明显的改善作用[4]。以羊栖菜为主要药物组成的复方制剂—调脂护肝方由海藻(羊栖菜)制大黄、茯苓、泽泻、丹参、葛根组成,以健脾化湿,消痰活血为制方原则,临床已证实有改善脂肪肝症状,降低血清TC,TG, ALT、AST,改善肝纤维指标和B超的图象变化[5]。作者观察到调脂护肝方和羊栖菜有减轻体重,改善肝指数减低血清TG作用。调脂护肝方还有降低血清TC和提高血清HLD—C作用。调脂护肝方有降低血清ALT,AST,MDA,提高血清SOD作用。羊栖菜也有一定降低血清AST,和提高血清SOD作用,而复方胆碱制剂(东宝甘泰)对以上生化指标没有明显的改善作用,这与方氏的实验结果类似[6]。目前研究表明非酒精性脂肪肝并非是一种单独的临床与病理表现,其常与肥胖、高脂血症相关,是代谢综合征在肝脏的表现[7]。本研究表明调脂护肝方有减轻大鼠体重和调血脂作用,至于它能否改善代谢综合征的其它表现,以及它能否改善这些表现的共同发病机制—胰岛素抵抗有待于进一步实验证实。
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1 王吉耀. 脂肪肝临床流行病学. 中华肝脏病杂志,2002,8(2):115.
2 范建高,朱军,李新建,等. 上海市成人脂肪肝患病率及其危险因素流行病学调查. 中华肝脏病杂志, 2005,13(2):83.
3 肖培根主编. 新编中药志. 北京:化学出版社,2002.880~882.
4 张美稀,陈圣高,郑文君,等. 海藻(羊栖菜)干预高脂饲养大鼠脂肪肝的量效研究. 浙江临床医学, 2006,8(6):452~453.
5 张美稀,王怀村,王昌信,等. 调脂护肝方治疗脂肪肝临床研究. 中医药信息杂志, 2005,12(4):14~15.
6 方继伟,陈曦,范建高,等.胆碱复合物对大鼠高脂饮食脂肪性肝炎是否有治疗作用.肝脏,2004,9(1):40.
7 Marchesini G, Brizi M, Bianchi G, et al. Nonalcoholic fatty liver disease: a feature of the metabolic syndrome. Diabetes, 2001, 50(8):1844~1850.