子宫内膜癌PTEN蛋白及P53蛋白的异常表达

【摘要】  目的 探讨子宫内膜癌组织抑癌基因PTEN及p53异常表达的意义。 方法 采用免疫组织化学SP法检测62例子宫内膜癌、16例子宫内膜增生过长和9例正常子宫内膜组织PTEN蛋白及P53蛋白的表达情况，表达率的差异采用卡方检验。 结果 子宫内膜癌、子宫内膜增生过长和正常子宫内膜组 的PTEN蛋白表达缺失率分别为64.52%、50%和11.11%，子宫内膜癌和子宫内膜增生过长组明显高于正常子宫内膜组（P<0.01）,但前两组间差异不显著；子宫内膜癌组、子宫内膜增生过长和正常子宫内膜组的P53蛋白阳性表达率分别为46.77%、50%和55.56%，三组间无显著差异（P>0.05）；PTEN蛋白表达缺失和P53蛋白阳性表达与子宫内膜癌组织分化程度无相关关系(P>0.05)；在子宫内膜癌组中，PTEN蛋白表达缺失组P53蛋白阳性表达率为37.50%，显著低于PTEN阳性表达组的63.64%(P<0.05)。 结论 PTEN蛋白在子宫内膜癌的发生中可能起着比P53蛋白更为重要的作用。

【关键词】  子宫内膜癌; 抑癌基因; PTEN; p53; 免疫组织化学

    Abstract: Objective  To study the significance of abnormal expression of  tumor suppressor genes PTEN and p53 in endomatrial cancinoma. Methods  Immunohistochemical method was used to detect the expression of PTEN and p53 in 62 cases of endomatrial carcinoma (EC),16 cases of endometrial hyperplasia (EH) and 9 cases of normal endometrium (NE). Results  The negative expression rate of PTEN protein was 64.25% in EC and 50% in EH,  significantly higher than that in NE (11.11%) (p<0.01), but there was no significant difference between EC  and EH. The positive expression rates of  P53 protein in EC, EH and  NE were 46.77 %, 50% and 55.56%, respectively, with no significant difference among them (P>0.05). The deletion of protein expression and the positive expression of P53 protein were not significantly related with the differentiation of endomatrial carcinoma (P>0.05). The positive expression rate of P53 protein in the PTEN negative expression and positive expression groups were 37.50% and 63.64%, respectively, and the former was significantly lower than the later  (P<0.05).  Conclusion  PTEN may play a more important role than P53 protein in  endomatrial carcinogenesis.

    Key words: endometrial carcinoma;  tumor suppressor genes;   PTEN;   p53; immunohistochemistry

    子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤总数的20%～30%，且近年来发病率逐年上升，但其发病机制尚不完全清晰［1,2］。一般认为肿瘤的发生与抑癌基因突变累积有关。由于抑癌基因的突变，造成了其编码蛋白抑制细胞恶性增殖的功能降低，细胞不断增殖，累积到一定程度可能导致细胞恶性转化，肿瘤发生。PTEN（phophatase and tensinhomolog deleted from chromosome）［3］是一种抑癌基因，其编码蛋白能够诱导细胞凋亡。PTEN突变造成其编码蛋白表达缺失，诱导细胞凋亡的功能随之减弱，甚至丧失，肿瘤发生。p53是研究最为广泛的抑癌基因，野生型p53的编码蛋白半衰期短（<20分钟），突变型P53蛋白半衰期长（>24小时），因此用组织化学方法检测到的通常为突变型P53蛋白。本研究通过比较、分析PTEN蛋白及P53蛋白在子宫内膜癌、子宫内膜增生过长的表达情况，探讨抑癌基因突变在子宫内膜癌发生中的作用。

    1  材料与方法[*2]

    1.1  研究对象    收集抚顺市1988—2004年间刮宫及手术切除的子宫内膜组织87例，子宫内膜癌62例，其中低分化癌9例，中?高分化癌53例；（组织学分级腺体结构极少见，癌巢呈实性片状，细胞异型性明显，核分裂多见者为低分化癌;较多腺样结构或小腺体形成，腺体较规则，上皮排列紧密呈假复层或复层，或有乳头形成，有少量实性区，核分裂少见或易见者为中?高分化癌）子宫内膜增生过长16例；正常子宫内膜9例。

    1.2  研究方法

    标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 um连续切片，行常规组织学染色，镜检确定诊断并选取恰当部位用于免疫组织化学染色。

    免疫组织化学染色操作步骤：用SP法（链霉菌抗生物素蛋白?过氧化物酶连接法）行免疫组织化学染色，具体步骤如下：

    1） 常规脱蜡。

    2） 置于3% H2O2中室温下处理15  min（消除内源性过氧化物酶的活性）。

    3） 微波抗原修复。

    4） 10%正常山羊血清封闭切片15  min，倾去勿洗。

    5） 一抗37℃水浴1 h或4℃冰箱过夜18  h，取出恢复至室温。

    6） 二抗（生物素标记羊抗兔/鼠IgG）处理室温下20  min。

    7） 酶（辣根过氧化物酶标记链酶卵白素）处理室温下20  min。

    8） 各步骤间以0.01 M PBS液冲洗3  min*3。

    9） DAB显色（需镜下观察，适时终止），置流水中冲洗10  min；

    10） 苏木素衬染15 s左右，流水返蓝10  min；

    11） 梯度脱水、透明、中性树胶封固。

    已知阳性标本切片用于阳性对照，PBS缓冲液替代一抗用于阴性对照。

    1.3  阳性结果判定

    免疫组织化学染色是一种定性的检测方法，PTEN定位于细胞浆和/或细胞核，细胞浆和/或细胞核出现棕黄色颗粒为PTEN阳性细胞。随机选取10个高倍镜视野（40*10倍），阳性细胞数：≤30%记为阴性（-）；>30%记为阳性(+)（图1）。P53定位于细胞核，细胞核出现棕黄色颗粒为P53阳性细胞。随机选取10个高倍镜视野（40*10倍），计算阳性细胞数：≤30%记为阴性（-）；>30%记为阳性（+）（图2）。

    1.4  统计学处理

    用X2检验行组间率的比较，所有数据采用SPSS10.0统计软件处理。本组实验数据基本符合正态分布，故各组间率的差异比较采用卡方检验或确切概率法。

    2  结果[*2]

    2.1  PTEN和P53蛋白表达情况    如表1所示，PTEN蛋白表达缺失率在子宫内膜癌和子宫内膜增生过长组分别为64.52%和50%，均显著高于正常子宫内膜组的11.11% (P< 0.01)，有显著差异。但在子宫内膜癌和子宫内膜增生过长组间差异不显著。

    P53蛋白阳性表达率在子宫内膜癌、子宫内膜增生过长和正常子宫内膜组中，分别为46.77%、50%和55.56%,三组之间差异不显著(P>0.05)。表1  不同子宫内膜PTEN和P53蛋白表达情况

　　2.2  子宫内膜癌组织分化程度与PTEN蛋白及P53蛋白表达的关系    如表2所示，PTEN蛋白表达缺失率在中?高分化与低分化子宫内膜癌组无显著差异(P>0.05)；P53蛋白阳性表达率在中?高分化与低分化子宫内膜癌组也无显著差异(P>0.05)。表2  子宫内膜癌组织分化程度与PTEN蛋白及P53蛋白表达的关系

　　3  讨论

    PTEN蛋白具有双重特异性磷酸脂酶活性,能通过脱磷酸化磷酸酪氨酸、磷酸丝/苏氨酸，使第二信使PIP3去磷酸化，抑制细胞的有丝分裂，从而诱导细胞调亡［4］。PTEN基因突变使其蛋白表达缺失，丧失抑制细胞增殖功能，促进细胞恶性转化［5］。本研究显示，与正常的子宫内膜相比，PTEN蛋白表达缺失率在子宫内膜增生过长和子宫内膜癌均显著增高，且表现出从正常子宫内膜、子宫内膜增生过长到子宫内膜癌逐渐增加。此结果提示PTEN基因突变可能是子宫内膜癌发生的原因之一。高谨等［6］研究发现PTEN蛋白表达缺失与子宫内膜癌的分化程度有关，本研究发现低分化与中?高分化组缺失率的差异虽然不显著，但呈下降趋势。PTEN蛋白缺失是否可以作为判断肿瘤细胞分化程度的标准尚需进一步探讨。

    p53基因是迄今研究最为广泛的抑癌基因，其突变与肿瘤的发生、关系密切［7,8］。p53基因分为野生型和突变型。野生型P53蛋白能维持细胞正常生长、抑制细胞恶性增殖，防止细胞的恶性转化，但半衰期很短，免疫组织化学方法难以检测到，而突变型P53蛋白的半衰期长，所以组织化学方法检测到的主要是突变型P53蛋白［9］。突变型P53蛋白不仅失去了对肿瘤的抑制作用，反而能促进细胞的恶性转化。本研究中，突变型P53蛋白阳性表达率在各组子宫内膜中无明显差异，可能与本文样本数量小有关，有待进一步研究。同时也提示了p53基因的突变在子宫内膜癌发病机制中的重要性不及PTEN。

    本研究未发现PTEN蛋白与P53蛋白表达之间的相关关系，提示PTEN与P53蛋白的表达在子宫内膜癌的发生中可能是两个独立事件，尚有待深入研究。

【】
  ［1］Parker S L, Tong T, Bolden S, et al. Cancer statistics ［J］. CA cancer J Clinl, 1996, 46(1): 5227-5233.

　　［2］Caduff RF, Svoboda Neamann SM, Johoston CM, et al. Molecular analysis in endometrium ［J］. Cancer, 1997, 81: 219-227.

　　［3］Nagasa S, Yamakama H, Sato S, et al. Identuficaion of a 790 kilobase of common allelic loss in chromosome 10q25-26 in human edomatrial cancer ［J］. Cancer Res, 1997, 57: 1639-1633.

　　［4］Waehama T, Dixon J E, The tumor suppressor, PTEN/MMAC1, dephosphorylates the lipid second messenger, phosphatidylinositor3,4,5?triphosphate ［J］. J Biol Chem, 1998, 273: 13375-13382.

　　［5］Tamura M, Gu J, Takino T, et al. Tumor suppressor PTEN inhibition of cell invasion, migration, and growyh: differential in volvement of focal adhesion kinase and pl30cas ［J］. Cancer Res, 1999, 59(2): 442-449.

　　［6］高谨, 彭芝兰, 王和等. 子宫内膜癌组织中抑癌基因PTEN突变分析 ［J］. 实用癌症杂志， 2001， 16（6）： 587-590.

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　　［8］朱有法， 朱景旭， 许敬尧等. 大肠腺瘤不典型增生及癌变组织中p53基因的表达及意义 ［J］. 中华病杂志， 1996， 5： 306-308.［9］Lame D P, A death in the life of p53 ［J］. Nature, 1993, 362: 786-787.