葛根素预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织含水量的影响

                     作者：潘登 张三强 师桂萍 谭军

【摘要】  目的 观察葛根素预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织含水量的影响，为葛根素的临床应用提供依据。 方法 制作大脑中动脉缺血2 h后再灌注损伤模型。将SD大鼠72只随机分为假手术组（S组）﹑致死性缺血再灌注组（IR组）、葛根素预处理组（P组）各24只，各组大鼠分别按脑缺血再灌注后24 h、72 h、120 h处死动物时间的不同，每组再分为3个亚组，每个亚组8只大鼠。采用干湿重法测定脑组织含水量，观察预处理对缺血2 h再灌注损伤24 h、72 h、120 h脑组织含水量的影响。 结果 IR组及P组实验术后24 h、72 h、120 h各亚组脑组织含水量均显著高于S组各亚组（P均＜0.01）；但P组各亚组脑组织含水量均低于同期IR组各亚组（P＜0.05）。结论 葛根素预处理能显著减少大鼠局灶性脑缺血后脑组织含水量，对脑组织具有保护作用。

【关键词】  葛根素；预处理；缺血再灌注；保护作用
    Effects of puerarin pretreatment on rat brain tissue water content after cerebral ischemical reperfusion injury

    【Abstract】 Objective  To observe the effects of puerarin pretreatment on rat focal brain tissue water content after cerebral ischemical reperfusion injury in order to provide basis for puerarin clinical application. Methods  Reperfusion injury model in 2 hours after arteria cerebri media ischemia.72 SD rats randomly divided into pseudooperation（group S，n=24），fatal ischemia reperfusin（group IR，n=24） and puerarin pretreatment group（group P，n=24），each group subdivided into 3 subsets（each n=8） according to the time of putting rats to death. Brain tissue water contents were determined with the dry-wet method to observe the effects of pretreatment at the 24th，72nd and 120th hour brain tissue water contents after ischesia 2-hour reperfusion injury. Results  Water contents in brain tissue at the 24th，72nd and 120th hour of all subsets of both group IR and P were significantly higher than those of all subsets of group S（all P<0.01）；synchronization water contents were lower in subgroups of group P than of group IR（P<0.05）. Conclusion   Puerarin pretreatment could obviously reduce the rats’ water contents in brain tissue after focal cerebral ischemia and has protection on brain tissues.

    【Keywords】  Puerarin；pretreatment；ischemia-reperfusion；protection

    缺血性脑血管疾病是严重危害人类健康的一种疾病。研究发现预先给予脑组织短暂缺血，可以增强其对再次缺血的耐受性；用药物代替预处理，有助于防止缺血性脑血管疾病。近年来研究表明［1～6］，中药对大鼠脑损伤后脑水肿有明显的作用，葛根素是传统中药，许多实验表明［7～9］葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用。本实验以大脑中动脉缺血再灌注大鼠为实验模型，旨在观察葛根素预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时脑组织含水量的影响，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料  选用纯种雄性Sprague-Dewley（SD）大鼠72只（新乡医学院实验动物中心提供），体重250 g～350 g。自由饮用自来水，饲用普通颗粒型大鼠饲料（含蛋白23%、脂肪4.7%、钠盐0.24%），动物房温度控制23 ℃～27 ℃，光暗周期12 h。

    1.2 主要药品和仪器  葛根素注射液0.2 g（批号060901，四环科宝制药有限公司），乌拉坦（上海第一生化制药厂），BA110S型天平（德国Sartorius公司），全自动生化分析仪（德国产）。

    1.3 方法

    1.3.1 动物模型制作  longa等［2］的制作方法制作大鼠大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)缺血再灌注模型。以20%乌拉坦(5 mg·kg-1)对大鼠腹腔注射麻醉成功后，取仰卧位，于颈部皮肤常规纵行切口约2.5 cm，钝性游离左侧颈总动脉(CCA)，结扎同侧CCA近心端和颈外动脉(ECA)分叉部，距CCA末端约5 mm处剪口，将直径0.2 mm尼龙线沿颈内动脉(ICA)方向插入深度由分叉部约(18.5±0.5) mm于ICA近心端结扎该动脉，全层缝合切口，于脑缺血手术2 h后抽出尼龙线1 cm行再灌注，实验中保持大鼠体温(37±0.5) ℃至苏醒，麻醉清醒后大鼠MCAO模型的神经功能评分采用Zea longa评分法［3］，0分：无神经系统功能缺失症状，活动正常者；1分：不能完全伸展对侧前爪者；2分：出现左侧horner症，爬行时出现向右转圈者；3分：行走时身体向右偏瘫倾倒者；4分：不能自发行走者，意识丧失者。评分为0分和4分者均被剔除。

    1.3.2 实验分组  将72只SD大鼠随机分为三组，每组各24只。假手术组(S组)：仅暴露双侧CCA、不结扎，30 min后缝合颈部切口；缺血再灌注组(IR组)：缺血2 h后再灌注；葛根素组(P组)：术前72 h经腹腔注射葛根素注射液100 mg·kg-1·1次·d-1，共3次。各组大鼠分别按脑缺血再灌注后24 h、72 h、120 h处死动物时间的不同分为不同亚组，每亚组8只，分笼饲养。

    1.3.3 标本采集  在SD大鼠脑缺血再灌注后第24 h、72 h、120 h，S组、IR组和P组分别脱颈致死，断头后迅速取脑，取大脑视交叉后2 mm厚的脑组织块，用作脑组织含水量的测定。

    1.3.4 脑组织含水量的测定  采用干湿重法测定缺血侧及对侧脑组织含水量：将所取的视交叉后2 mm厚的脑组织块，用滤纸吸干表面水分后，用预先称重编号的锡纸包裹，用分析天平（0.1 mg）称湿重。之后放入－70℃冰箱保存。将全部标本放入105℃恒温烤箱中烘干，24 h后冷却，称干重。根据公式：脑含水量＝（湿重－干重）/湿重×100%进行。

    1.3.5 统计方法  所有数据应用SPSS13.0统计软件处理，组间比较采用t检验。

    2 结果

    三组大鼠实验术后不同时间脑组织含水量变化的检测结果，见表1。表1  各组大鼠脑组织水含量变化（略）注：经t检验，与S组比较△△P＜0.01；与IR组比较*P＜0.05。

    表1显示，IR组及P组实验术后24 h、72 h、120 h各亚组脑组织含水量均显著高于S组各亚组（P均＜0.01），于72 h达到峰值；但P组各亚组脑组织含水量均低于同期IR组各亚组（P＜0.05）。

    3 讨论

    脑水肿是缺血性脑血管病主要的临床并发症之一，其引起颅内压增高是脑梗死早期死亡的主要原因，而且脑水肿会引起脑血流进一步下降，加重脑缺血损伤。据报道，急性神经元坏死主要是由于钠﹑氯和水进入细胞，终使细胞膜肿胀，破裂直至死亡。实验发现脑缺血早期脑血管Na+、K+-ATP酶活性升高，致使钠和水进入脑内增加，引起脑细胞外水增多，形成血管源性水肿。同时，由于缺血后EAA和自由基的释放，神经细胞内钙超载，线粒体等细胞器受损，使神经细胞ATP生成较少，导致突触膜Na+、K+-ATP酶活性下降，神经细胞内外钠钾交换失调，钠滞留于细胞内使大量水份从细胞外进入细胞内，引起继发性脑细胞内毒性脑水肿。

    本实验显示，IR组及P组实验术后24 h、72 h、120 h各亚组脑组织含水量均显著高于S组各亚组（P均＜0.01）；但P组各亚组脑组织含水量均低于同期IR组各亚组（P＜0.05）。提示葛根素预处理虽不能完全控制脑水肿，但可以在术后24 h、72 h、120 h明显减轻脑水肿，预处理后24 h已经发挥了对缺血再灌注损伤的保护作用，并持续到至少用药后第144 h，表明葛根素预处理能显著减少大鼠局灶性脑缺血后脑组织含水量，对脑组织具有保护作用。

【】
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