霍乱弧菌快速检测卡的临床应用价值

               作者：陈杭薇　吕楠　赵敏　李兵    

【摘要】  　　目的 探讨一步法快诊霍乱技术（快速检测卡）在临床用于霍乱弧菌感染患者的筛查作用。方法 应用O1/O139 群霍乱弧菌检测试剂盒（胶体金法）（O1/O139 群霍乱弧菌快速检测卡）检测来我院肠道门诊就诊的72例腹泻患者粪便标本，同时作便常规镜检、动力试验和便培养与之对照。结果 快速检测卡和对照试验均未呈现阳性结果。结论 快速检测卡操作简单方便, 报告结果迅速，无需任何仪器设备，适于在肠道门诊和部队疫区现场使用，具有推广意义。

【关键词】  霍乱弧菌　快速检测　临床应用

　　Abstract： Objective  To study the screening function of rapid one?step detection of vibrio cholerea by Rapid Immune Colloidal Gold Strip in the patients with vibrio cholerea infection. Methods  The feces samples of 72 patients with diarrhea were tested by Rapid Immune Colloidal Gold Strip for vibrio cholerea (O1/O139  kit), and the feces were tested by routine microscopic examination, culture and motility test as comparison.Results  Negative results were observed in both the Rapid Immune Colloidal Gold Strip test and the control test. Conclusion  The method of detecting vibrio cholerea with Rapid Immune Colloidal Gold Strip is simple, quick, and suitable in use in intestinal tract department of a hospital or in epidemic military area. It is significant to spread this test technique.

　　Key  words： vibrio cholerea; rapid detection; clinical application

　　霍乱病为烈性肠道传染病，其诊断是以病原学检查为主要依据。 我们在肠道门诊将腹泻患者粪便标本应用一步法快诊霍乱技术（快速检测卡）作检测，同时行便常规镜检、动力试验和便培养与之对照，探讨检测卡在临床用于霍乱弧菌感染的快速筛查和辅助诊断的确切作用。

　　1  材料和方法

　　1．1  标本来源  2006年7—9月到北京军区总医院肠道门诊就诊的腹泻并疑似霍乱患者72例，其中男性40例，女性32例，年龄16～84岁，平均（42±16）岁。按要求采双份粪便标本。

　　1.2  试剂  O1/O139 群霍乱弧菌检测试剂盒（胶体金法）（O1/O139 群霍乱弧菌快速检测卡）产自北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司，（国药证字S20040024 S20050010），在有效期内使用。
   
　　检测卡的原理是免疫层析反应, 检测时直接使用患者的粪便标本，其中含有的待测物可与层析材料上包被的相应受体发生高特异性、高亲和性的免疫反应，随之通过胶体金得出肉眼直观的显色条带。

　　1.3  实验方法  （1）粪便标本的制备：挑取待测粪便标本0.5 g 加入内含1ml稀释液瓶中，用滴管反复吹打5次以上，拧紧瓶盖备用。（2）从密封袋内取出霍乱弧菌快速检测卡，在非样本端标记样本号。将检测卡直接插入稀释液瓶内，或将试剂卡平置于台面，用滴管吸取瓶内样本液，滴加4滴（约150 μl）于卡的样本孔内，从插入或滴加样本开始计时，让样本液通过毛细作用扩散至检测区，10～15 min 观察结果，15 min 后无效。产生两条玫瑰红色带，则为阳性结果，表明标本内含有O1 群霍乱弧菌抗原（蓝色卡），或O139群霍乱弧菌抗原（黄色卡）。若检测区内仅有一条玫瑰红色带出现， 为阴性结果， 表明样品内无霍乱弧菌或含量过低。（3）对照实验： 将新鲜粪便作悬滴或暗视野显微镜检查，可见穿梭状运动的弧菌，即为动力试验阳性，随后用O1 和（或）O139群抗血清做制动试验。另外，按常规法将粪便标本种入碱胨水增菌液，37 ℃ 培养6～24 h，分离于4号琼脂平板，进行霍乱弧菌培养。

　　2  结果

　　2．1  本组72例患者， 血象：WBC（6.6～23.6）×109/L，N 0.54～0.93。粪便常规： WBC 2～30，RBC 3～30。发热20例，体温最高38.7 ℃。确诊为细菌性痢疾15例。

　　2．2  霍乱弧菌快速检测卡检测结果全部粪便标本均为阴性，但阳性对照卡显示两条清晰的玫瑰红色带。新鲜粪便标本作悬滴或暗视野显微镜检查，未见穿梭状运动的弧菌，动力试验阴性。粪便标本作霍乱弧菌培养全部阴性。

　　3  讨论
   
　　霍乱病的病原诊断一般多采用细菌分离鉴定法。此法须经过增菌、分离培养及血清学鉴定等多个步骤，至少需要20+h 才能得出确切结果。 
　　近年来，陆续报道了一些快速诊断方法, 比如多聚酶联反应法（PCR），但此法至少也要4～6  h 才能得结果, 且实验条件要求高，需要特殊的实验室才能进行，因此很难在临床和防疫工作中推广。
   
　　本研究检测72例腹泻患者粪便标本应用快速检测卡，并与动力试验和便培养作对照，虽然均未呈现阳性结果，但是通过检测我们对一步法霍乱快诊技术的掌握和应用意义有了深刻了解。
   
　　曾有研究者[1]在实验室内采用模拟霍乱病人粪便标本方法, 检测报告一步法快诊霍乱技术的最低检出菌量为106 cfu/ ml，证实敏感性不及常规的分离鉴定法，因而推测对于含菌量<106 cfu/ ml 的粪便标本可能漏检。但罗隆泽等[2]报告79 份便标本直接一步法快诊的结果显示，该法用于疑似霍乱病人和密切接触者粪便标本检出时的阳性率高于常规的分离鉴定法。分析原因可能是用常规法漏检的这些患者在就诊前多已服用过抗菌药物，因而常规培养就很难分离到活菌，而一步法快诊的原理是检测标本中的霍乱弧菌抗原，故除活菌外，死菌中有效抗原只要尚未分解就仍能检出。所以快检卡法不仅能查出活菌，也能检出死菌，以及部分隐性感染者，在这一点上临床就具有重要的现实意义。
   
　　霍乱的传染源是病人和带菌者。轻型病人、隐性感染者和恢复期带菌患者所起的传染作用更大。霍乱的两个生物型均可经水、食物、苍蝇以及日常生活接触而传播。部队官兵多为集体生活，一旦发病极易发生暴发流行。
   
　　霍乱病感染的人多，发病的人少，轻型的多，重型的少。部分感染者不发病，是因为机体抵抗力强，但仍可能排出活的或死的细菌，只要细菌抗原达到足够量，快诊检测卡就能测出阳性结果。　
   
　　一步法快诊霍乱技术操作简单方便, 报告结果迅速[2～5]，无需任何仪器设备，可在10  min 内作出疫情初报, 很适于肠道门诊和部队疫区现场使用，具有推广意义。

【】
  　　[1] 刘 端，罗隆泽，王淑京，等. 一步法快诊霍乱技术现场应用的效果观察[J]. 疾病监测，2001, 16(7) : 273 - 275.

　　[2] 罗隆泽，郭宗琪，吕 强，等. 霍乱一步法快诊技术现场应用研究[J]. 预防医学情报杂志，2001,17(4) :301-302.

　　[3] 邓志红，胡世雄，曾亚雄，等.O139霍乱弧菌快速检测试纸条临床效果评价[J].实用预防医学,2004,11(5):934-937.

　　[4] 张兰荣，严寒秋，甄博郡，等.快速法检测外环境水中霍乱弧菌结果的分析研究[J].卫生检验杂志,2005,15(6):710-711.

　　[5] 李少彤，栾玉明，郭钜旋，等.　胶体金法快速检测霍乱弧菌诊断试验的研究设计与分析[J ].中国卫生检验杂志,2006,16(3):269-271.