草珊瑚颗粒提取工艺优选及异秦皮啶含量测定

【摘要】  目的：优选草珊瑚颗粒最佳提取工艺。方法：采用正交试验及HPLC法，以出膏率及异秦皮啶含量为综合考察指标，优选最佳提取工艺。结果：最终确定的提取工艺方法为：加12倍水提取3次，第1次2h，第2次及第3次1h。结论：为制剂的生产及质量控制提供了合理的量化指标及理论依据。

【关键词】  草珊瑚颗粒 提取工艺 异秦皮啶 含量测定

   草珊瑚颗粒由单味中药草珊瑚经水提得到的浸膏及适量的辅料组成，用于风热感冒、急性咽炎等症具有良好的临床疗效。草珊瑚药材中异秦皮啶含量较高，具有显著的抗菌、抗癌作用，是草珊瑚的主要有效成分之一。为此，我们以出膏率及异秦皮啶含量为综合考察指标，采用正交试验法对草珊瑚的提取工艺进行优选，并对经中试放大工艺制备的草珊瑚颗粒进行了异秦皮啶的HPLC含量测定。

    1  仪器、材料与试剂

    1.1  仪器  HP1100高效液相色谱仪：G1311?9700四元泵，G1314?97003UV紫外检测器，G2170色谱工作站。

    1.2  材料与试剂  草珊瑚，由江西安远金树苗圃基地提供，经本所张金亭研究员鉴定为Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai.。　　异秦皮啶对照品购自药品生物制品检定所(批号：110837-200304)。　　乙腈，磷酸，甲醇为色谱纯，其余均为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  提取工艺研究  在预试验的基础上选择加水量、提取时间及提取次数这个影响因素为考察对象。取草珊瑚药材300g，每组试验3个平行样，加热回流提取。以干浸膏重及异秦皮啶含量为考察指标，每个因素各取3个水平，选用L9(3)4正交试验表设计因素水平，由各因素极差确定因素影响主次及最佳水平，并用方差分析评价各因素对制备工艺影响的显著性，见表1、表2、表3、表4。

    从以上结果可以看出，影响因素大小为C＞A＞B。提取次数的变化对结果差异显著，因此选择提取3次。加水量的变化亦对结果同样显示差异显著，我们将加水量确定为12倍水。提取时间对结果无显著影响，我们将提取时间确定为第1次2h，第2次及第3次1h，最终确定的提取工艺方法为：12倍水提取3次，第1次 表1  正交试验因素及水平设计表3  以干膏量为考察指标方差分析结果表4  以异秦皮啶含量(mg)为考察指标方差分析结果2h，第2次及第3次1h。

    2.2  异秦皮啶含量测定

    2.2.1  色谱条件  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以乙腈-0.1%磷酸溶液(20：80)为流动相，检测波长为344nm,理论塔板数按异秦皮啶峰应不低于4000。　　经方法学考察，其线性关系回归方程为：Y=2729.2X－1.6951，r=0.9999。异秦皮啶在0.014～0.21μg之间呈良好的线性关系；精密度RSD为0.52%；稳定性试验8h内RSD为1.14%；重复性试验RSD为0.86%；平均回收率RSD为0.75；阴性对照无干扰。

    2.2.2  对照品溶液的制备  取异秦皮啶对照品17.5mg，精密称定，置500ml量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每ml含异秦皮啶4.2μg的溶液，即得。

    2.2.3  供试品溶液的制备  取装量差异下的草珊瑚颗粒，研细，取75mg，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率25KHz)40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

    2.2.4  含量测定  取供试品溶液及对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪中,测定结果见表5。表5  5批样品的含量测定结果结果表明：5批样品平均每袋含异秦皮啶2.18mg，批间含量差异不大。

    3  讨论

    依据实验室小试确定的提取工艺方法，我们对草珊瑚颗粒进行了5批中试放大试验,投料量为每批50kg。批次间出膏量较为稳定，制得的草珊瑚颗粒每袋重3g，其中含干浸膏1g，含量测定结果RSD为1.45%,表明批次间异秦皮啶含量比较稳定。优选的提取工艺及含量测定方法为化生产及质量控制提供了有效保障。