大肠癌组织中id-1和P53表达的意义
作者：田卫华，张煦，苏晓路，冯颖
【摘要】 目的: 探讨分化抑制因子-1(id-1)和P53在大肠癌过程中的意义及两者的相关性. 方法: 应用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测id-1和P53在51例大肠癌组织、14例癌旁组织和15例正常组织中的表达. 结果: id-1和P53在大肠癌组织中的阳性表达率高于正常组织及癌旁组织（癌组织vs正常组织,癌旁组织 P＜0.05）；id-1阳性表达率与大肠癌的分化程度、浸润深度、Duckes?分期及局部淋巴结转移之间的差异有统计学意义（P<0.05）；P53阳性表达率与癌浸润深度、Dukes?分期及局部淋巴结转移之间的差异有统计学意义（P<0.05）；id-1 和P53在大肠癌中表达存在正相关性（r=0.440,P<0.01）. 结论: id-1的过表达是细胞恶性变的标志之一，P53的表达与之有关，二者在大肠癌的转移和生物学行为中发挥着重要作用.
【关键词】 结直肠肿瘤 微阵列分析 id-1 基因 P53 免疫组织化学
【Abstract】AIM: To investigate the expressions of inhibitors of differentiation-1(id-1) and P53 in colorectal carcinoma. METHODS: The expression levels of id-1 and P53 proteins in colorectal carcinoma tissues (n=15),pericancerous tissues (n=14) and normal tissues (n=15) were examined by tissue microarray technique and immunohistochemistry. RESULTS: The expression levels of id-1 and P53 were upregulatedin colorectal carcinoma tissues compared with that in pericancerous tissue and normal tissues (P<0.05). The overexpression of id-1 was strongly related to the differentiation，invasiveness,Duckes′ stage,and metastasis of colorectal carcinoma(P<0.05). Overexpression of P53 was strongly related to the invasiveness,Duckes′ stage,and metastasis of colorectal carcinoma (P<0.05). There was a positive correlation between the expressions of id-1 and P53 (r=0.440,P<0.01). CONCLUSIONS: Overexpression of id-1 is a signal of cell malignant change. Expressions of P53 and id-1 play critical roles in metastasis and biological behavior of colorectal carcinoma.
【Keywords】 colorectal neoplasms；microarray analysis；id-1；genes,P53； immunohistochemistry
0 引言
肿瘤的形成是细胞周期中增殖与分化的调控发生紊乱的结果. 分化抑制因子,又称DNA 结合抑制因子(inhibitors of DNA binding),属于螺旋-环-螺旋(HLH) 转录因子家族成员之一,对细胞分化起负性调节作用，具有抑制细胞向成熟分化和促进细胞增殖的作用［1］. 野生型P53(wt-P53)的功能是将DNA受损的细胞阻滞于G1或G2 期进行修复. 而突变型P53则失去了对细胞周期监控作用，导致细胞无限增殖，因而，P53基因的突变或失活是多种肿瘤发生、发展过程中的重要事件. id-1和P53同时为细胞周期G1期进入S期的关键蛋白，关于两者之间的关系研究甚少，我们利用组织芯片结合免疫组化技术检测id-1和突变型P53（mt-P53）在大肠癌组织、癌旁粘膜及正常组织中的表达，旨在探讨它们在大肠癌发生、发展中的作用及相互关系.
1 材料和方法
1.1 材料 收集甘肃省肿瘤2003/2005和兰化医院2001/2005外科手术切除大肠腺癌石蜡包埋标本，病史资料齐全，术前未经放化疗51例，男29例，女22例，年龄26～74（平均59.7）岁. 高分化24例，中分化19例，低分化8例. 浸润至肌层18例，达浆膜层33例. 有淋巴结转移12例，未转移39例. 另取该组病例中肿瘤切缘处正常大肠粘膜（病理证实）标本15例，作为对照. 癌旁粘膜在大肠癌蜡块相应部位标记，在组织芯片制作时取出14例. 将选取的大肠腺癌石蜡包埋标本重新切片，HE染色. 由病理专家复查HE切片，在显微镜下分别用标记笔画圈标记出典型癌灶（富有肿瘤细胞且无坏死出血的区域）及癌旁粘膜（距肿瘤2 cm的正常组织），然后在组织蜡块上相应的区域标记选取组织点. 兔抗人id-1系美国Santa Cruz(sc-488)公司产品，鼠抗人P53,SP超敏试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福州迈新公司.
1.2 方法 参照［2］的方法应用组织芯片仪制备组织芯片. 免疫组化采用S-P法，染色步骤按说明书进行，抗体id-1工作液浓度为1∶100，P53为即用型，DAB显色，苏木素复染. 以PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性片作为阳性对照. 在显微镜下观察，id-1和P53阳性染色为黄色、棕黄色或棕褐色颗粒，id-1定位于细胞质，P53定位于细胞核. 采用二级记分法，阳性细胞计数：1分为阳性细胞≤10%；2分为11%～50%；3分为51%～75%；4分为>76%. 染色强度分类：0分为无色；1分为黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色（深浅与背景色相对比）. 二者记分相乘大于3者为阳性.
统计学处理：对计数资料，组间率的比较以及关联性分析采用 χ2检验，两指标相关分析采用Spearman等级相关分析. 统计学软件采用SPSS11.0软件包，P<0.05时具有统计学意义.
