恶性血液病33例细胞遗传学分析

【摘要】  目的：分析恶性血液病细遗传学改变。方法：选择临床确诊恶性血液病33例，采用直接法和培养法进行染及体标制备，及显著技术进行核型分析。结果：33例中12例发现明显异常染色体核型，16例为正常核型。结论：染色体检查在恶性血液病诊断分型中具有重要价值。

【关键词】  恶性血液病；染色体；细胞遗传学

    1   资料与方法

    1.1   一般资料   33例中男19例,女14例；年龄27～90岁，中位年龄57岁；病程10天～8年，平均1.8年。所有患者均经血常规、骨髓细胞学检查，急性白血病（AL）行白血病免疫表型测定，骨髓增殖性疾病和骨髓增生异常综合征、肿瘤骨髓转移行骨髓活检，多发性骨髓瘤行免疫全套、骨骼平片及心电图检查等，按陈灏珠等[1]主编的《实用内》的诊断标准确诊。33例中急性非淋巴细胞白血病（ANLL）8例，其中M1 1例，M2 2例，M3 2例，M4 1例，M5 2例；急性淋巴细胞白血病（ALL- L1）1例，慢性粒细胞白血病（CML）8例，慢性淋巴细胞白血病（CLL）1例，多发性骨髓瘤（MM）4例，浆细胞白血病（PL）1例，骨髓增生异常综合征（MDS）6例（RA 4例，RAEB 2例），骨髓纤维化（MF）1例，真性红细胞增多症（PV）1例,骨髓转移性恶性肿瘤2例。

    1．2   仪器   超净台，双目显微镜，电热恒温培养箱，台式自动平衡离心机，-20℃冰箱，不锈钢正压滤器，精密数显酸度计等。

    1．3   细胞遗传学分析   染色体标本制备采用直接法和培养法。用 0.2%肝素湿润之针筒抽取骨髓2ml左右,注入取样瓶,在超净室内抽取标本计数有核细胞,按（1～2）×106/ml无菌接种于1640培养基内。37℃恒温箱放置16小时。加入长春花碱或秋水仙胺应用液使终浓度为0.05 μg/ml, 37℃温箱1小时。离心：1000 rpm×10min，弃上清液。加入预温至37℃的0.075 mol/L氯化钾液8ml,轻轻打匀,置37℃ 30 min。加入1 ml固定液轻轻打匀, 离心1000 rpm×10 min。离心后3次固定。再离心1000 rpm×10 min，弃上清,加适量固定液配成细胞悬液,置4℃保存;气干法制片后，10%Giemsa染色后镜检。全部标本用热变性姬姆萨R显带技术进行核型分析。核型异常的描述按人类细胞遗传学国际命名体制[ISCN（1995）]。

    2   结      果

    33例中17例发现明显的异常染色体核型，16例为正常核型，见表1。CML 8例中有7例出现典型Ph易位即t(9,22) （q34,q11），1例出现2Ph染色体。MM 4例中有3例分别累及x、1号、5号、10号、13号、14号、21号、22号染色体的增加、缺失或易位。AL 9例中有3例初发白血病出现异常染色体。1例MDS转变为ANLL（M1）出现染色体的增加；1例M5出现3号、11号、13号、19号染色体缺失、增加及超3倍体易见；1例ALL（L1）出现Ph染色体。2例M2、2例M3、1例M4、1例M5处于完全缓解期未发现异常染色体。MDS 6例中有1例RAEB出现10号染色体缺失。骨髓转移性肿瘤2例出现1号、9号、14号、19号染色体增加。

    3   讨      论

    正常人的体细胞染色体数目为46条，并有一定的形态和结构。染色体异常是指染色体的数目不正常和结构畸变，如染色体断裂、缺失、倒位、易位等。恶性血液病的发生与染色体异常密切相关。随着细胞遗传学研究的不断进展，染色体分析在CML、AL、MDS、MM等诊治中起着重要作用。尽管大多数CML只需临床表现和血液学检查即可诊断，但有时与类白血病反应及其它骨髓肿瘤鉴别非常困难，Ph染色体的发现使CML诊断更准确。谢新报道CML患者95%为Ph（+）且在临床血液学已经缓解时Ph染色体仍持续存在。CML急变时除Ph染色体外，70%的病例常出现额外的染色体改变，最多见的改变为2Ph，+8和i(17q)。本组8例CML中5例处于血液学缓解期，均Ph（+）；3例急变中2例Ph（+），1例为2Ph。

    大约50%～93%的ANLL和90% ALL有克隆性染色体异常，60% ANLL和66%ALL属于特异性染色体重排，不仅在ANLL和ALL之间明显有别，而且在它们的各自亚型间也互不相同，因此成为白血病可靠分型标志。薛永权等[2]报道72% M3有t(15;17),50% M2有t(8;21),71% M4EO有inv(16)。ANLL还有10余种和白血病FAB亚型不相关的染色体异常，主要为数目异常：+8、-5、7q-,5q-,-Y、+11、+13、+21、9q-、i(17q) 、20q-、+22等。ANLL的染色体异常于病情缓解时消失，复发时又再现。本组9例AL中6例处于血液学缓解期，未发现染色体异常，1例MDS转变为ANLL（M1）表现为47, xx,+M(?+16)，1例M5超3倍体易见，1例ALL出现Ph染色体。

    MDS克隆性染色体畸变可见于40%～70%的原发性MDS和95%左右的相关性MDS（t-MDS）[3，4]。MDS染色体畸变类型十分复杂，主要以染色体缺失和数目异常为主，特别是+8、-7/del(7q)、del(5q) 、del(20q) 和-Y 这5种最常见，而染色体易位则较少见（5%）。本组6例MDS中仅检出1例MDS（RAEB）有染色体异常，表现为10号染色体缺失，故认为与MDS分型有关，发现MDS（RA）染色体异常检出率低。

    报道MM初诊时染色体异常克隆的检出率为18%～35%，疾病进展期的检出率40%～60%[5]。MM常涉及多条染色体的数目和结构异常，异常克隆多以超二倍体和亚二倍体形式存在，整二倍体很少见，最具特征的数目改变为出现三体或单体染色体，以三体更多见。13号染色体异常高频率发生于MM，被认为是MM的标志。染色体的结构异常包括缺失、易位、重复和倒位等，主要累及1、14号染色体，14q+是MM主要的染色体的结构改变，90%以上的MM细胞株和74%以上的MM患者的细胞具有14q32相关变化。本组4例MM中有2例有14q+，1例表现为X、1、10、13、21、M1、M2多条染色体缺失或增加。

    本组病例中有2例首发表现为外周血三系减少，骨髓活检提示肿瘤骨髓转移，1例胸部CT提示肺癌，同时发现1、9、12、14、19染色体异常。

    综上所述，发现染色体检查在恶性血液病诊断、分型中起着重要作用，是其它检查不能代替的，所以我们主张只要疑为恶性血液病，均要做染色体检查。

【文献】
  [1] 陈灏珠，主编. 实用内[M].第11版.北京:人民卫生出版社,2001：2095-2199.

[2] 薛永权，过 宇，吴亚芳，等.1058例急性非淋巴细胞白血病的细胞遗传学分析[J].中华医学遗传学杂志,2001,

18(4):247-250.

[3] Olney HJ, Le Beau MM.The cytogenetics of myelodysplastic syndromes[J]. Best Pract Res Clin Haematol,2001;14(3):479-495.

[4] Aul C,Giagounidis A,Germing U,et al. Myelodysplastic syndromes. Diagnosis and therapeutic strategies[J]. Med klin(Munich), 2002,97(11):666-676.

[5] Debes-Marum CS,Dewald GW,Bryant S,et al.Chromosome abnormalities clustering and its implications for pathogenesis and prognosis in myeloma[J]. Leukemia,2003;17(2):427-436