子宫腺肌病患者在位与异位内膜热休克蛋白27的表达及意义
【摘要】 目的 研究子宫腺肌病(AM)患者在位及异位内膜中热休克蛋白27（HSP27）的表达水平及其在AM发生中的意义。方法 采用免疫组化SABC法检测AM患者在位及异位内膜各40例和正常子宫内膜40例中HSP27表达情况。结果 AM患者在位内膜组HSP27的表达低于异位内膜组（P<0.05），两组均显著高于正常子宫内膜组（P均<0.01）。AM患者在位及异位内膜中，增生期与分泌期相比HSP27表达差异无显著性（P>0.05），正常子宫内膜增生期与分泌期相比HSP27表达差异有显著性（P<0.05）。结论 AM患者在位及异位内膜HSP27的表达高于正常子宫内膜，并且失去在正常子宫内膜中的周期性变化。HSP27表达水平升高在AM的发生发展中有重要意义。子宫内膜中HSP27表达水平的检测，对AM的诊断有一定价值。
【关键词】 子宫腺肌病；在位内膜；异位内膜；热休克蛋白27
子宫腺肌病（adenomyosis，AM）是子宫内膜腺体及间质异位于子宫肌层，它与子宫内膜异位症有不同的病因及发病机理，已将其划分为一种独立的子宫疾病。随着发病率的升高，AM日益受到人们重视，但其发病机理目前尚不明了，临床诊断及也有一定困难。本实验通过测定AM内膜中热休克蛋白27（HSP27）的表达，从一侧面探讨其发病机理，为临床诊断及治疗提供一定理论依据。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选取2003年2月～2004年10月遵义医学院附属病理科子宫内膜标本蜡块。AM在位内膜40例，其中增生期20例，分泌期20例；异位内膜40例，其中增生期20例，分泌期20例；正常子宫内膜40例，其中增生期20例，分泌期20例。所有AM患者标本均经病理检查确诊，术前3个月未用激素治疗。
1.2 试剂 HSP27兔抗人多克隆抗体（武汉博士得生物工程有限公司），即用型SABC免疫组化染色试剂盒（武汉博士得生物工程有限公司），DAB显色试剂盒（武汉博士得生物工程有限公司）。
1.3 实验方法 石蜡切片脱蜡至水，高温高压法进行抗原修复，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，非免疫源性动物血清封闭，滴加一抗浓度1∶100，4℃冰箱过夜，分别设置阳性对照（已知HSP27阳性的乳腺癌切片）及空白（PBS代替一抗）对照，SABC法按试剂盒说明书进行操作。
1.4 结果判定 光镜下胞膜、胞浆内有棕黄色颗粒为阳性，阳性细胞必须结构清晰、定位好，着色明显高于背景。所有结果均由我院病理科专业人员鉴定、复核。采用15400机图像分析仪对切片进行图像分析。每张切片随机选取10个视野，测平均光密度值。
1.5 统计学方法 所有数据用SPSS11.5统计学软件包处理。结果均以x±s表示，采用t或t′及单因素方差分析。
2 结果
子宫内膜中HSP27阳性信号主要分布在腺上皮细胞的胞核和胞浆中，基质细胞的胞核中也有表达。异位内膜组HSP27表达最强，明显强于在位内膜组（t=2.05，P<0.05）及正常子宫内膜组（t=5.07，P<0.01），并且在位内膜组中的表达又要强于正常子宫内膜组（t=2.83，P<0.05）。HSP27在正常增生期内膜中的表达最弱，明显低于正常分泌期内膜。在AM组，无论在位还是异位内膜增生期与分泌期相比，其表达差异均无显著性，见表1。
3 讨论
热休克蛋白是生物体对各种物理化学物质及潜在的有害物质(如缺血、缺氧等)做出反应时产生的一种蛋白质。HSP27的合成可以提高机体适应能力，如感染、耐热、耐低温等［1］。它作为细胞“分子伴侣”参与蛋白的折叠、装配、降解、转移及修复，能促使变性损伤的蛋白恢复正常，维持细胞稳态。又可以协同免疫系统对抗原进行加工和递呈，参与免疫应答过程。另有研究表明［2］：HSP表达增多与细胞损伤有关，具有抗凋亡作用。目前已证实：细胞表面的Fas/Apro-1受体与相应配体结合诱导细胞凋亡，HSP表达后可以使细胞产生一种新的物质，包裹自身及外来抗原，使得细胞凋亡发生。HSP还可能通过影响癌基因如：P53，bal-2等的表达参与对细胞凋亡调控。
表1 各组光密度值比较（略）
与同组增生期相比，a：t=3.70，P<0.01，b：t=0.33，c：t=0.33，P>0.05；与正常组相比，e：t=2.83，f：t=5.07，P均<0.01；与在位组相比，g：t=2.05，P<0.05
一般情况下，HSP27分布于细胞的胞浆中，应激时大部分HSP27位于细胞核，包围核仁，恢复正常状态后仍移入胞浆。这种移位现象可以增强细胞对损害的耐受，维持细胞正常代谢，提高细胞生存能力。本实验结果显示，正常子宫内膜中HSP27主要表达于腺上皮细胞的胞浆中，少量定位于细胞核。这与于月成［3］等研究的结果相一致。而AM患者在位及异位内膜中HSP27主要定位于腺上皮细胞的胞核，部分定位于细胞浆。AM患者HSP27的分布的异位可以提高AM患者月经期剥脱的子宫内膜细胞对损害的耐受程度，为子宫内膜的异位种植增加机会［4］。也有人［5］认为异位病灶本身存在缺血缺氧、炎症刺激等不良因素而导致异位内膜中HSP27的分布发生异位，有利于异位内膜在非正常环境中耐受各种免疫细胞及细胞因子的作用而维持生长。
实验结果表明正常子宫内膜中HSP27维持在很低的水平，增生期内膜光密度值为178.07±18.61，随着分泌期的到来，HSP27的表达逐渐增强，光密度值为158.54±14.50，两者相比差异有显著性（P<0.01），表明正常子宫内膜中HSP27的表达受甾体激素的调控，随月经周期而呈现周期性波动。而在AM患者中，不管是在位内膜，还是异位内膜，其增生期与分泌期相比HSP27表达的差异均无显著性。AM患者异位内膜HSP27表达光密度值为147.33±17.78，高于在位内膜（光密度值155.97±19.81，P<0.05），与正常子宫内膜（光密度值168.31±19.20)比较，P<0.01。提示AM患者的在位内膜与正常内膜存在不同，有较高水平的HSP27储备。这种内膜进入宫腔以外的部位后，更能耐受不利因素的影响而种植成活，为AM。
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［1］ Hildebrand B，Wust P，Ahlers O，et al.The cellular and molecular basis of hyperthermia ［J］.Crit Rev Oncol Hematol，2002，43(1)：33-56.
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