褶合曲线分析法测定银黄含片中绿原酸和黄芩苷的含量
[关键词] 褶合曲线分析法；银黄含片；绿原酸；黄芩苷
Abstract： Objective To determine the contents of chlorogenic acid and baicalin in the Yinhuang Buccal Tablet. Methods The computer-aided convolution curve method has been applied to determine the content of chlorogenic acid and baicalin simultaneously. Results The average recovery and standard deviation of chlorogenic acid and baicalin were 97.28%,0.88%,98.11%,0.45%,respectively.Conclusions The convolution curve method was simple, convenient and fast in detecting the contents of chlorogenic acid and baicalin
Key words：Convolution curve method; Yinhuang Buccal Tablets; Chlorogenic acid; Baicalin
银黄含片主要由金银花、黄芩提取物经加工制成，具有清热解毒、消炎作用，用于急性扁桃体炎、急性咽炎所致的咽喉肿痛。绿原酸、黄芩苷分别是金银花、黄芩提取物中的主要成份，部颁标准对该片未作含量测定，2005年药典只提供了银黄口服液的含量测定是高效液相色谱法。笔者有关通过试验，采用褶合曲线分析法，直接测定银黄含片中绿原酸和黄芩苷的含量，获得较好的结果，为银黄含片的质量监控提供了简便、快速的分析方法。
1 原理褶合
曲线分析法[1-2]是一种新的数学变换方法(它的数学属性是一种新的复合导数变换)。它根据谐波分析原理，将光谱吸收曲线看作是多个数学分量加权而成。褶合曲线分析系统采用类似多项式回归的褶合变换技术，提取出6个数学分量（Q0～Q5），组成一种新型的独立光谱体系――各数学分量随平均波长的变化轨迹。褶合曲线从数学分量的角度反映了物质对光的吸收特性，因此，与吸收曲线一样具有定性定量的特征，由于它提供的信息量大，可以显示吸收曲线的细微差别，可以减少相似组分的数学相关性，所以在物质定性和混合物定量方面具有明显的优点。褶合曲线分析法在定量分析双组分混合体系中某一组分（比如为A）时，可以自动查找另一组分（比如为B）褶合曲线的交零点，并测定A在该点的贡献，计算出相应的浓度CA，反之则找出组分A褶合曲线的过零点，测定B在该点的贡献，计算出B的浓度CB。
2 实验部分
2.1 主要仪器、药品和试剂UV-7501型紫外－可见分光光度计（无锡科达仪器厂）；褶合光谱软件（第二军医大学研制）；清华同方Pentium4电脑；HS6150超声波清洗器（天津市恒奥科技有限公司）；绿原酸对照品（批号为0753－200111）与黄芩苷对照品（批号为110715－200212）均由药品生物制品检定所提供；银黄含片（批号为0409032、0411002、0412065，规格每片重0.65 g）由成都地奥制药集团有限公司生产；实验用水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2.2 溶液的配制
2.2.1 绿原酸储备液：精密称取绿原酸对照品8.17 mg，置100 ml棕色容量瓶中，用70%乙醇溶液溶解，超声15 min，用70%乙醇稀释至刻度，配制成浓度为81.7 μg・ml-1的储备液。
2.2.2 黄芩苷储备液：精密称取黄芩苷对照品16.35 mg，置100 ml棕色容量瓶中，用70%乙醇溶液溶解，超声15 min，用70%乙醇稀释至刻度，配制成浓度为163.5 μg・ml-1的储备液。
2.2.3 样品溶液：取银黄含片20片，精密称定，研细，精密称取约相当一片量的粉末，置100 ml棕色容量瓶中，加70%乙醇60～70 ml，超声15 min，用70%乙醇稀释至刻度，过滤，精取续滤液2 ml置50 ml棕色容量瓶中，加0.2 mol・L-1 HCl溶液稀释至刻度，摇匀待测。
2.2.4 基质溶液：按处方配制缺金银花提取物、黄芩提取物的基质样品，按"2.2.3"项下的制备方法处理得到基质溶液。
2.3 方法与结果
2.3.1 线性考察：① 精密量取绿原酸储备液0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5 ml、3.0 ml，分别置50 ml棕色容量瓶中，用0.20 mol・L-1HCl溶液稀释至刻度，用0.20 mol・L-1HCl溶液作空白，在318 nm处测定其相应的吸收度值（A），并与浓度（C）进行线性回归，得回归方程A＝0.0718C+0.0005，r＝0.9999。测得绿原酸的线性范围为0.817～4.902 μg・ml-1。②精密量取黄芩苷储备液1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5 ml、3.0 ml、3.5 ml，分别置50 ml棕色容量瓶中，用0.20 mol・L-1HCl溶液稀释至刻度，用0.20 mol・L-1HCl溶液作空白，在278 nm处测定其相应的吸收度值（A），并与浓度（C）进行线性回归，得回归方程A＝0.0585C+0.0208，r＝0.9998。测得黄芩苷的线性范围分别为3.260～11.445 μg・ml-1。
2.3.2 吸收曲线及扫描波长选择：分别准确量取绿原酸、黄芩苷储备液2 ml置100 ml量瓶中，加入相应比例的基质溶液及两者混合组成的供试品溶液，加0.20 mol・L-1HCl溶液至刻度，摇匀，以0.20 mol・L-1HCl溶液为空白，在波长210～400 nm内，波长间隔为0.1 nm，用紫外-可见分光光度计对绿原酸、黄芩苷及两者混合组成的供试品溶液分别进行扫描，得吸收光谱图见图1。
2.3.3 稳定性试验：用上述混合溶液在0、30、60、90、120、150、180、210、240 min各在210～400 nm扫描一次，结果混合组成的供试品溶液在240 min内稳定（吸光度值无明显变化）。
2.3.4 确定最佳测试条件──回收率试验⑴对照液的配制:将绿原酸及黄芩苷储备液分别稀释成1.226 μg・ml-1及8.175 μg・ml-1的应用液。⑵模拟样品液的配制:按初试银黄含片样品中测得的绿原酸与黄芩苷的含量，精密量取绿原酸与黄芩苷储备液适量，加基质物混合，按"2.2.3"项下方法制备五份浓度不同的模拟样品液，其浓度控制在各含量的±20%之内。⑶操作:上述模拟样品液分别以0.20 mol・L-1HCl溶液为空白，采集250～350 nm，间隔2 nm的吸收度信息，用褶合光谱仪的双组份定量分析功能系统处理，两者的回收率，结果见表1。根据回收率的测定结果所选的最佳测试条件分别如下：绿原酸N＝15，J＝3，Wm＝318.5；黄芩苷N＝25，J＝3，Wm＝307.6（N为测试点数，J为多相式数，Wm为平均波长）。最佳褶合光谱见图2~3。⑷样品含量测定:取样品三批，每个批号各20片，精密称定、研细，精密称取约相当一片的重量的粉末置100 ml棕色量瓶中，加70%乙醇60 ml，超声振荡15 min，用70%乙醇稀释至刻度，过滤，精取续滤液2 ml置50 ml棕色量瓶中，加0.20 mol・L-1HCl溶液稀释至刻度，摇匀。按回收率测定项下测定两组分含量。结果见表2。表1 绿原酸和黄芩苷的回收率（略） 表2 样品含量测定结果（略）.
3 讨论
褶合曲线分析法可以不经分离直接测定混合物中各组分的含量，从而避免化学分离过程中产生的误差，但本文是褶合曲线分析法在分光光度分析中的应用，所以必须以服从定律并具有吸收加和性为前提。本法涉及最佳测试条件的问题。由于双组分定量软件对吸收曲线褶合时可以从测定波长范围内截取任意一段，因此，不同波长段就有不同回收率和含量测定结果。理想状态是RSD→0，ER→100.00%。本实验曾用过以水、0.20 mol・L-1HCl、50%乙醇作为提取溶剂进行试验，均因水溶性杂质较多而致使扫描波峰与对照品不一致，选择70%乙醇则提取物纯度好，扫描峰与对照品一致，效果好。将本法测得的绿原酸和黄芩苷的含量按mg・片-1计算时，其结果与HPLC法[3]基本一致。本实验表明，采用褶合曲线分析法可直接测定银黄含片的含量，测定中不需对样品进行特殊处理，方法简便易行，结果满意。
[参 考 文 献]
[1] 王建军，吴玉田.褶合光谱法在药物分析领域内的应用[J].药学进展，2002,26（1）：1-4.
[2] 郑 红，朱臻宇，吴玉田.褶合曲线分析法测定复方磺胺甲唑片的含量[J].药学杂志，2000，20(10)：605-607。
[3] 李 坚，冯焕村，杜 璐.HPLC法测定银黄含片中绿原酸和黄芩苷的含量[J].广东药学院学报，2005，21（6）：683-684.
