活血定眩丸的抗炎与镇痛作用研究
【摘要】 目的观察活血定眩丸的抗炎、镇痛作用。方法采用乙酸扭体法和热板法测定痛阈值和镇痛程度;采用二甲苯和乙酸致炎法测定耳肿胀度和腹腔毛细血管通透性。结果活血定眩丸可明显升高痛阈值、减少痛觉反应、减轻耳肿胀程度、降低腹腔毛细血管通透性。结论活血定眩丸具有较好的抗炎、镇痛作用。
【关键词】 活血定眩丸 抗炎 镇痛 椎动脉型颈椎病
活血定眩丸是由炙黄芪、生石决明、桑寄生、菊花、天麻等15味中药组成,具有活血通络、定眩止痛、补益肝肾的功效,主要用于椎动脉型颈椎病引起的脑供血不足、头晕、颈项僵硬、肩背酸痛、手臂麻木等症,具有很好的临床疗效。实验研究表明,活血定眩丸能有效改善椎动脉型颈椎病动物模型的血液流变学[1]。为进一步验证其与临床功效相关的作用,特进行了以下实验。
1实验材料
1.1实验用药
活血定眩丸由甘肃中医学院附属药剂科生产,为骨科临床专用药,每克丸剂含生药2.242 g,实验时用蒸馏水配制成混悬液。阿司匹林由江西赣江制药有限责任公司生产,批号070215,实验时用蒸馏水配制成混悬液。乙酸由北京化工厂生产,批号070327。二甲苯由成都科龙化工试剂厂生产,批号061005。伊文氏蓝由上海化学试剂公司生产,批号 060516。
1.2实验动物
SPF级KM小鼠,体质量(20±2)g,由甘肃中医学院中心实验室提供,合格证号: SCXK(甘)2004-0006-0000025。
1.3实验仪器
热板测痛仪由冀星实验仪器有限公司生产,型号 RCY-2。分析天平由北京赛多利斯仪器系统有限公司生产,型号BS 100 S。电动离心机由金坛市恒丰仪器厂生产,型号 XYJ80-2。分光光度计(日本),型号UV-2401PC。打孔器等均由甘肃中医学院中心实验室提供。
2实验方法与结果
2.1镇痛作用—扭体法[2-4]
取小鼠50只,雌雄各半,按质量随机分为5组,每组10只,分别为空白对照组、阿司匹林组(0.15 g/kg,用于解热镇痛时的成人常用量为1日0.9~1.8 g)、活血定眩丸高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组,给药剂量分别为含生药4.484 g/kg,2.242 g/kg,1.221 g/kg,相当于临床成人日用剂量的20,10,5倍),按0.03 mL/g灌胃,空白对照组给予等体积的生理盐水,每天灌胃1次,连续6 d,于第6 d灌胃后1 h,腹腔注射0.7 %的乙酸0.2 mL/只,观察15 min内各组小鼠扭体反应(腹部内凹,伸展后肢,臀部抬高)次数。数据用均数±标准差(±s)表示,各组数据比较采用单因素方差分析(one|way ANOVA),用SPSS 13.0统计软件处理。结果见表1。表1活血定眩丸对乙酸致小鼠扭体次数的影响 由表1可知,高、中、低剂量组及阿司匹林组与空白对照组比较差异均有高度统计意义(P<0.01);高、中、低剂量组与阿司匹林组比较无统计学意义;高、中、低各剂量组之间比较差异无统计意义。表明活血定眩丸具有良好的镇痛作用,其减轻乙酸引起的疼痛的效果与阿司匹林相似,且未出现明显的量效关系。
2.2镇痛作用—热板法[2-4]
取雌性小鼠50只,按质量随机分为5组,每组10只,分组、给药方法及给药剂量同2.1,于第6 d灌胃后1 h,放入预先调好水温[(55±0.5)℃]的热板上,分别于30,60,90,120 min时测定小鼠痛阈,当小鼠足部接触热板受热刺激至发生舔足反射的时间为痛阈值。数据分析同上。结果见表2。表2活血定眩丸对热板致小鼠疼痛的影响 由表2可知,30 min时,高、中剂量组,阿司匹林组与空白对照组比较差异均有统计意义,低剂量组与空白对照组比较差异无统计意义;60 min、90 min、120 min时,高、中、低剂量组,阿司匹林组与空白对照组比较差异均有统计意义;30 min、120 min时,高、低剂量组之间比较差异有统计意义。表明活血定眩丸可提高小鼠疼痛阈值,其作用与阿司匹林相似。高剂量组对抗热板致小鼠疼痛的时间和程度明显优于低剂量组,说明其存在一定的量效和时效关系。
2.3抗炎作用—二甲苯致小鼠耳肿胀法[2-4]
取KM小鼠50只,雌雄各半,按质量随机分为5组,分组及给药方法同2.1,给药剂量除阿司匹林组外,其余各组亦同2.1,阿司匹林组给药剂量为0.5 g/kg(用于抗炎、抗风湿时的成人常用量为1日3~6 g)。每天灌胃1次,连续6 d,于第6 d灌胃后1 h,于每只小鼠左耳两面涂100 %二甲苯约0.1 mL;右耳作空白对照。1 h后,脱颈处死小鼠,沿耳廓颈线剪下两耳,用9 mm直径打孔器分别在同一部位冲下中央组织块,天平称重,以左耳组织块重-右耳组织块重为肿胀度,并肿胀抑制率。肿胀抑制率(%)=(A-B)/A×100 %(式中A代表空白对照组肿胀度,B代表受试药物组或阳性对照药物组肿胀度)。数据分析同上。结果见表3。
由表3可知,高、中、低剂量组及阿司匹林组与空白对照组比较差异均有统计意义;低剂量组与阿司匹林组比较差异有统计意义;高、低剂量组之间差异比较有统计意义。表明活血定眩丸可抑制二甲苯致小鼠耳廓的肿胀度,且高剂量组和阿司匹林组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用明显优于低剂量组。
2.4抗炎作用—乙酸对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响[2-4]
取KM小鼠50只,雌雄各半,按质量随机分为5组,每组10只,分组、给药方法及给药剂量同2.3,于第6 d灌胃后30 min尾静脉注射0.5 %伊文氏蓝溶液0.01 mL/g,随即腹腔注射0.7 %的乙酸0.02 mL/g,30 min后脱颈处死,腹部开口,用6 mL生理盐水分次冲洗腹腔,收集洗液加生理盐水至10 mL,2000 r/min离心10 min,取上清液于590 nm处测光密度,以腹腔上清液光密度值表示血管通透性。数据分析同上。结果见表4。表3活血定眩丸对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响 注:与空白对照组比较★P <0.05,★★P <0.01;与低剂量组比较▲P< 0.05
表4活血定眩丸对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 注:与空白对照组比较★P <0.05,★★P <0.01
由表4可知,高、中、低剂量组及阿司匹林组与空白对照组比较差异均有统计意义;高、中、低剂量组与阿司匹林组比较差异无统计意义;高、中、低各剂量组之间比较差异无统计意义。表明活血定眩丸可降低小鼠腹腔毛细血管通透性,其效果与阿司匹林相似,且未出现明显的量效关系。
3讨论
活血定眩丸以黄芪补气生血、补气行滞,其为补气之圣药,用之可补气养血,起祛瘀散结之效,故为君药;丹参、鸡血藤、三七粉、葛根、白芷、白芍活血化瘀、舒筋通络、解肌止痛为臣;佐以天麻、钩藤、石决明、血蒺藜、地龙、菊花熄风止痉、平肝潜阳、定眩明目;桑寄生补益肝肾、强筋骨;甘草调和诸药为使。诸药合用共起到活血通络、定眩止痛、补益肝肾之功。
椎动脉型颈椎病可因颈椎失稳使颈部引起异常牵张和局部的创伤性炎症,累及颈部肌群,引起颈部肌肉持久痉挛性收缩,导致肌肉的血流循环障碍,毛细血管通透性增强,释放出某些致痛因子,如乳酸、5-羟色胺、缓激肽、钾离子等,进而作用在损伤区的感受器,而引起头痛、颈项部疼痛。扭体法和热板法分别通过腹腔注射乙酸的化学刺激和热板物理刺激的方式而引起疼痛;腹腔毛细血管通透性实验和二甲苯致耳肿胀实验均可引起毛细血管通透性增加、白细胞渗出增多组织水肿等一系列炎症反应,因此可通过以上4个实验检测活血定眩丸的镇痛、抗炎作用。实验结果显示,活血定眩丸可明显降低毛细血管通透性,减轻早期炎性渗出和炎性细胞水肿,提高痛阈值,减少疼痛反应,具有明显的抗炎、镇痛作用。以上实验结果支持了该组方椎动脉型颈椎病的有效性,为临床提供了实验依据。
【】
[1]宋敏,蒋宜伟,邱桐.活血定眩丸对椎动脉型颈椎病兔血液流变学、ET、NO的影响[J].甘肃中医学院学报,2005,22(6):23-27.
[2]谢秀琼.中药新试剂开发与应用[M].北京:人民卫生出版社,2006:652-657.
[3]中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学、药、毒理学)[M].北京:人民卫生出版社,1994:55-179.
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