HPLC法测定肾炎四味胶囊中黄芩苷的含量

【摘要】  目的 探讨肾炎四味胶囊中黄芩的主要有效成分黄芩苷含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法：色谱柱：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－水－磷酸溶液（47∶53∶0.2）；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：35 ℃。结果 黄芩苷在进样量为0.199 2～0.996 0 μg范围内线性关系良好，r=0.999 5；黄芩苷的回收率为98.40%，RSD为1.78%；3批肾炎四味胶囊平均含黄芩苷25.4 mg/粒，RSD＝0.99％。结论 该方法灵敏度高，重复性好，可作为肾炎四味胶囊中黄芩苷的含量测定方法。

【关键词】  肾炎四味胶囊；黄芩苷；HPLC法；含量测定

    1 实验材料

    1.1  仪器

    高效液相色谱仪（岛津LC－10ATvp，日本岛津公司）；N-3000色谱工作站。

    1.2  试药

    甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯；黄芩苷对照品（药品生物制品检定所，供含量测定用，批号0715-200211）；肾炎四味胶囊（湖北午时药业股份公司，批号20060404、20060406、20060408）。

    2 方法与结果

    2.1  色谱条件

    色谱柱：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－水－磷酸溶液（47∶53∶0.2）；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃。

    2.2  供试品溶液的制备

    取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.1 g，精密称定，加70%乙醇100 mL，称定质量，超声（功率80 W、40 kHz）处理30 min，放冷，加70%乙醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 μm的膜滤过即得。

    2.3  空白溶液的制备

    取除黄芩外的其余处方量饮片，按制备工艺方法制备缺黄芩的空白样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺黄芩的空白溶液。

    2.4  对照品溶液的制备

    精密称取黄芩苷对照品9.96 mg，置100 mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1 mL中含黄芩苷49.8 μg）。

    2.5  空白干扰试验

    分别精密吸取对照品溶液、空白溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定,得色谱图（见图1）。结果表明，在与黄芩苷对照品色谱峰相同位置上无峰出现，说明缺黄芩空白对照对测定无干扰。

    2.6  线性关系考察

    精密吸取浓度为99.6 μg/mL的黄芩苷对照品溶液2、4、6、8、10 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 μL进样，测定其峰面积积分值，结果见表1。

    以浓度(μg)对峰面积积分值进行线性回归，其回归方程为：

    Ａ＝1.995×106Ｃ－6 540，r＝0.999 5。

    结果表明黄芩苷在0.199 2～0.996 0 μg范围内具有良好的线性关系。

    2.7  精密度试验

    精密吸取同一份供试品溶液10 μL，重复进样5次，测定黄芩苷峰面积积分值，分别为1 045 128、1 052 125、1 046 985、1 056 248、1 049 652，RSD为0.42%。结果表明：该仪器精密度良好。

    2.8  稳定性试验

    分别精密吸取同一份供试品溶液10 μL，于0、3、6、9、12 h进样，测定其峰面积积分值，分别为1 056 325、1 052 125、1 048 628、1 050 325、1 061 254，RSD为0.48%。结果表明，供试品溶液在12 h内基本稳定。

    2.9  重复性试验

    取同一批号样品（批号20060404）5份，按上述条件依法平行处理并测定黄芩苷含量，分别为25.10、25.16、25.42、25.16、24.47 mg/粒，RSD为1.41%。结果表明本法重复性好。

    2.10  回收率试验

    精密称取已知含量为49.91 mg/g（批号20060404）样品0.05 g，共5份，分别精密加入黄芩苷对照品溶液（0.261 mg/mL）10 mL，再按“2.2”项下方法制备供试液，精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测定黄芩苷含量，结果表明，本法加样回收率好。结果见表2。

    2.11  成品及饮片含量测定  按上述含量测定方法测定3批（批号分别为：20060404、20060406、20060408）样品中黄芩苷的含量，含量为25.1、25.4、25.6 mg/粒，n=3；平均25.4 mg/粒，RSD＝0.99％。取黄芩饮片细粉约0.3 g，照《药典》2005年版一部黄芩项下的含量测定法依法测定，其含量分别为9.2%、10.3%、9.7%。

    结果表明：投料所用饮片符合《中国药典》2005年版一部规定黄芩中黄芩苷的含量不得少于9.0%的规定[2]211。

    3 结论

    肾炎四味片系《卫生部药品标准》中药成方制剂第12册收载的品种[3]。具有活血化瘀，清热解毒，补肾益气的功能；主要用于慢性肾炎。原剂型为片剂，由于片剂存在崩解时间长，溶出速率慢，其生物利用度较差，且日服用量为24片，服用量大，病人不易接受，故将肾炎四味片改为肾炎四味胶囊。

    黄芩与黄芩苷有降血压作用[4]，黄芩苷有利尿、解毒作用[5]，与本品功能主治基本吻合，故选择黄芩苷进行含量测定，以控制其内在质量，确保临床疗效。

    本含量测定方法中，测定波长与流动相的选定，《中国药典》2005年版一部[2]212，其分离度达到1.5以上。经测定3批样品，黄芩苷平均含量为25 mg/粒，考虑到大生产的损耗等，暂规定本品限度为：黄芩苷不得少于20.0 mg/粒。

【参考】
  [1] 王宝琴. 中成药质量标准与标准物质研究[M].北京:中国医药科技出版社，1994：28-31.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:人民卫生出版社，2005：211-212.

[3] 中华人民共和国卫生部. 中华人民共和国卫生部药品标准，中药成方制剂·第12册[S].北京:人民卫生出版社，1997:86.

[4] 王浴生.中药药理与应用[M]. 北京：人民卫生出版社，1983：956-960.

[5] 柯铭清.中草药成分理化与药理特性[M].长沙:湖南科技出版社，1982：130-131.