四生汤对阴虚证小鼠自由活动能力和血清丙二醛含量的影响
【摘要】 探讨四生汤对甲状腺激素致阴虚证小鼠的作用及机制。 方法：选取健康昆明小鼠60只，随机分成6组。正常组和阴虚模型组予蒸馏水灌胃，低、中、高剂量四生汤组为治疗组，生脉饮为阳性对照药物，观察各组小鼠的一般生活状况并检测其自由活动能力和血清丙二醛的含量。 结果：四生汤能明显改善阴虚模型小鼠的口干、烦躁和体温升高（P＜0.05），提高小鼠的自由活动能力（P＜0.05），降低血清丙二醛的含量（P＜0.05）；但与生脉饮比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论：高、中剂量四生汤具有良好的养阴清热、生津止渴作用，可提高机体的活动能力和抗氧化损伤。
【关键词】 四生汤 阴虚 身体活动 抗氧化剂 小鼠
Zhang SF, Chen Z, Li B, Chen HY, Ling CQ, Wen XY. J Chin Integr Med/Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2008; 6(10): 1029?1033.
Received March 4, 2008; published online October 15, 2008.
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DOI: 10.3736/jcim20081008Open Access
Effects of Sisheng Decoction on spontaneous activity and serum concentration of malondialdehyde in mice with yin deficiency sydrome
Su?fang ZHANG1, 2, Zhe CHEN1, Bai LI1, Hong?yun CHEN1, Chang?quan LING1, Xin?yu WEN3
1. Department of Traditional Chinese Medicine, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China
2. Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Pulmonary Hospital, Tongji University, Shanghai 200433, China
3. Department of Biochemistry, Chinese People's Liberation Army General Hospital, Beijing 100088, China
Objective: To assess the therapeutic effects of Sisheng Decoction, a compound traditional Chinese herbal medicine, on a mouse model of yin deficiency syndrome induced by thyroid hormone, and to make the preliminary study on its mechanisms.
Methods: Simultaneous modeling and treatment were carried out. Sixty mice were randomly divided into six groups: normal group, yin deficiency model group, low?, medium? and high?dose Sisheng Decoction group and Shengmai oral liquid group. Normal group and yin deficiency model group were administered with double distilled water. Spontaneous activity and serum concentration of malondialdehyde in different groups were detected.
Results: The symptoms of yin deficiency syndrome such as xerostomia, dysphoria and fervescence were improved in the Sisheng Decoction groups. Compared with the yin deficiency model group, the spontaneous activity was increased and the serum concentration of malondialdehyde was decreased in the Sisheng Decoction groups (P＜0.05). There was no significant difference between the Sisheng Decoction groups and the Shengmai oral liquid group (P<0.05).
Conclusion: Medium? or high?dose Sisheng Decoction is effective for nourishing yin, clearing heat, engendering liquid and allaying thirst. The above effects of Sisheng Decoction may be realised by improving the spontaneous activity and resisting oxidative damage.
Keywords: Sisheng Decoction; yin deficiency; physical activity; antioxidants; mice
恶性肿瘤患者放疗后往往出现纳呆、口干、口苦、盗汗、五心烦热、夜寐不安等症状，在中医里属于气阴两虚证的范畴，因此用健脾益气、养阴清热类中药能够明显改善患者的上述症状，从而提高放疗的完成率［1］。上海长海在临床中应用四生汤，并证实其具有减轻放疗毒副反应的作用［2，3］。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 健康昆明种小白鼠60只，雌雄各半，清洁级，体质量18～20 g，动物合格证号为SCXK（沪）2002?0002，由第二军医大学实验动物中心提供，分笼饲养，适应环境1 d后开始实验。随机分为6组：正常组、阴虚模型组、生脉饮组和低、中、高剂量四生汤组。每组各10只。
1.2 药物与试剂 四生汤（生黄芪、生地黄、生白术、生薏苡仁）干粉剂，生产批号为060516。由上海中医药大学药学院提供，水煮四生汤药液，用壳聚糖溶于1％冰醋酸溶液，提取上清液，然后真空干燥，将其碾成干粉，每克干粉相当于生药9 g。高、中、低3个剂量的浓度比为4∶2∶1，中剂量为临床人体等效剂量，以人65 kg、小鼠20 g折算［4］后，分别每天服用16.6、8.3、4.15 g/kg生药量的四生汤，相当于人临床日用量的18、9和4.5倍。生脉饮口服液，由杭州正大青春宝药业有限公司生产，批准文号为国药准字Z20025633，10 ml/支，常用剂量为30 ml/d；小鼠给药剂量以人65 kg、小鼠20 g折算［4］后为4.20 ml/(kg·d)。甲状腺片，由上海实业联合集团长城药业有限公司生产，批准文号为国药准字H31022151，沪卫药准字（1995）第063001号，40 mg/片，常用剂量40～120 mg/d；小鼠给药剂量以人65 kg、小鼠20 g折算［4］后为16.78 mg/（kg·d）。血清丙二醛（malondialdehyde, MDA）试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供。
1.3 主要仪器 体温计；倒置显微镜，OLYMPUS BH?2；超净工作台，由苏州净化仪器设备厂生产；KA?1000离心机，由上海安亭科技仪器厂生产；微量可调加样器，由法国GLISON公司生产；721分光光度计，由上海第三分析仪器厂生产；DigBehv?LA小鼠自发活动机视频图像分析系统，由上海吉量软件科技有限公司生产。
1.4 造模方法 ［5］配置甲状腺片混悬液，以16.78 mg/（kg·d）（折算方法同上）甲状腺片混悬液灌胃，连续给药10 d，制备阴虚模型。
1.5 治疗方法 采用造模与治疗同步的方式。上午阳性对照组（生脉饮组）予生脉饮灌胃，治疗组分别予高、中、低剂量的四生汤灌胃，阴虚模型组及正常组给予蒸馏水灌胃。下午除正常组予蒸馏水灌胃外，其余组均给予甲状腺片混悬液灌胃，共10 d。
1.6 检测指标
1.6.1 小鼠一般生活状况 观察小鼠的精神状态、毛色、活动度、形体、粪质、饮食量、饮水量及体质量等一般生活情况。
1.6.2 小鼠肛温 分别于治疗前后测量小鼠的肛温。先用70%的酒精消毒温度计，并把水银柱甩到凹槽以下，然后用左手抓取并固定小鼠，右手轻轻揉按肛门部，使肛门括约肌松弛，用酒精消毒，然后把温度计的金属头对准肛口，与小鼠的尾巴平行并沿着正中线的方向轻轻插入小鼠肛门口，深度为1.0～1.5 cm，静置3 min，然后读数，该温度为小鼠的肛温。
1.6.3 小鼠自由活动能力 造模第10天，末次灌胃后2 h，将小鼠放入DigBehv?LA小鼠自发活动仪的小盒中，每盒1只，等小鼠适应环境后，开始计时并拍摄5 min的自由活动情况。应用计算机视频图像分析系统进行分析，记录小鼠的自由活动情况，包括5 min内的活动次数、活动时间和平均速度。
1.6.4 小鼠血清MDA含量 小鼠眼眶取血，3 000 r/min离心15 min，分离血清待测，按MDA试剂盒说明书检测。
1.7 统计学方法 应用SPSS 12.0软件进行统计，所有数据用x±s进行统计描述。计量资料经正态分布检验和方差齐性检验后，多组间比较采用方差分析。
2 结 果
2.1 小鼠一般生活状况 从第4天起，阴虚模型组小鼠被毛较正常组稀疏，皮下脂肪较薄，脚掌颜色较正常组稍红，为紫色（正常组为淡红色），大便较干，小便色黄。至第10天，阴虚模型组小鼠毛色粗糙，易激怒，挣扎明显，触觉温度明显增高，说明阴虚证模型的制作较成功。而高、中剂量四生汤组和生脉饮组小鼠毛色相对光华润泽，体形硕壮，脚掌颜色嫩红，大小便正常。
2.2 小鼠平均饮食量和饮水量 用甲状腺激素灌胃的小鼠，平均饮食量和饮水量都呈增多趋势。给药组的平均饮食量均比阴虚模型组少（P＜0.05）；除低剂量四生汤组外，其余各给药组平均饮食量与正常组相比，差异均无统计学意义（P＞0.05）。各给药组的平均饮水量与阴虚模型组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），但阴虚模型组、生脉饮组和低剂量四生汤组平均饮水量较正常组明显增多（P＜0.05）。这也从一方面说明造模后的小鼠呈甲亢的阴虚状态，故饮食和饮水均增多，而高、中剂量的四生汤则能改善阴虚证小鼠的脾胃功能亢进，并减轻其口干和口渴的程度。见表1。
2.3 小鼠体质量 阴虚模型组与正常组和给药组体质量增长趋势基本一致。这可能是因为阴虚证小鼠均给予甲状腺激素灌胃后，饮食亢进，而本实验观察周期又较短，故体质量变化各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。
2.4 小鼠肛温 阴虚模型组小鼠用甲状腺激素灌胃后肛温明显升高，尤其是给药的第5天肛温升高最明显。第10天的组间两两比较结果显示，阴虚模型组的平均肛温明显比其余各组高（P＜0.05）；高、中、低剂量四生汤组和生脉饮组的肛温与正常组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），表明四生汤和生脉饮能降低阴虚证小鼠的肛温。但第5天的统计分析结果显示，生脉饮组与阴虚模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而低、中、高剂量四生汤组小鼠的肛温明显低于阴虚模型组和生脉饮组（P＜0.05），这也提示四生汤的清热作用优于生脉饮，且起效快。见表3。表1 各组小鼠的平均饮食和饮水量表2 各组小鼠的体质量 表3 各组小鼠的肛温
2.5 小鼠自由活动能力 各组小鼠5 min内的自由活动次数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。从活动时间和平均速度这两个指标来看，高、中剂量四生汤能够明显延长阴虚小鼠的活动时间并提高其平均速度（P＜0.05）；与生脉饮组比较，差异亦有统计学意义（P＜0.05）。阴虚模型组、生脉饮组和低剂量四生汤组无论是活动时间还是平均速度与正常组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；而高、中剂量四生汤组小鼠活动时间和平均速度与正常组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。活动时间和平均速度与体能呈正比，因此认为高、中剂量的四生汤能明显增强阴虚小鼠的自由活动能力，改善其虚弱的体质。见表4。 表4 各组小鼠的自由活动能力
2.6 小鼠血清MDA含量 高、中、低剂量四生汤能够明显减少血清MDA含量，与阴虚模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；高、中、低剂量四生汤的抗氧化作用与生脉饮比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 表5 各组小鼠的血清丙二醛含量
3 讨 论
四生汤由生黄芪、生地黄、生白术和生薏苡仁四味药物组成。其中生地黄味甘、寒，能清热凉血、养阴、生津，黄芪具有补气升阳、益卫固表、托毒生肌和利水退肿之效，生用也能清热生津，两者共为君药；白术益气健脾、燥湿利水，生用也具有清热之效，薏苡仁健脾利湿、清热排脓，共为臣药。故全方共奏滋阴补肾、清热生津和健脾益气之效。
中医学认为放疗的毒副反应或放射损伤，根据其致病特点，应归属中医学中“热邪”、“热毒”和“火邪”之类，其病机主要是射线热毒之邪侵袭人体，伤阴（血）耗气，损阴伤津，导致机体脏腑功能失调［6］。通过灌服甲状腺激素，在小鼠身上模拟出阴虚内热的症状，并用药物进行干预，结果发现四生汤能够明显改善阴虚证小鼠的虚弱症状，减轻烦躁，抑制体温升高，且脚掌垫无发红、发热等现象，并能够明显改善小鼠饮食亢进、口干、口渴等症状。其次，高、中剂量四生汤还能明显延长阴虚证小鼠的活动时间并提高其平均速度，高、中剂量组小鼠活动能力明显比阴虚模型组和生脉饮组强。研究表明各种氧自由基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物，如MDA［7］，因此MDA水平间接反映了组织受自由基损伤的程度。其值越高，说明细胞自由基增多，氧化损伤程度高，反之值越低，说明氧化损伤程度轻。四生汤能明显降低血清中MDA的含量，防止细胞自由基的损伤，故抗氧化损伤可能是四生汤养阴生津的作用机制之一。药理研究也证实，组成四生汤的药物中含有的多糖成分如黄芪多糖等均具有很好的抗氧化作用［8，9］。从另一侧面提示四生汤减轻恶性肿瘤患者放射毒副反应可能是通过提高恶性肿瘤患者的活动能力（体能）和抗氧化能力而实现。
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