过敏性紫癜患儿血清基质金属蛋白酶-9的检测及意义
【摘要】 目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在过敏性紫癜(HSP)中的作用。方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）方法测定40例HSP患儿不同时期的血清MMP-9水平。结果 HSP急性发作组血清MMP-9及C-反应蛋白（CRP）水平升高，与正常对照组和缓解组比较，差异均有统计学意义( t分别＝12.30、8.42、6.37、8.13，P均＜0.05)； HSP缓解组血清MMP-9仍高，与正常对照组比较，差异有统计学意义(t＝9.92，P＜0.05)； HSP急性期并发肾损害组及有胃肠道症状组患儿血清MMP-9水平升高，与无肾损害组及无胃肠道症状组比较，差异有统计学意义( t分别＝3.75、3.17，P均 ＜0.05)，而血清CRP水平差异无统计学意义(t分别＝0.96、0.56，P均＞0.05)。HSP急性期患儿血MMP-9水平与CRP浓度之间成直线正相关(ｒ=0.68， P ＜0.05)。结论 MMP-9参与了HSP疾病的病理生理过程，血清MMP-9测定对HSP，尤其是紫癜性肾炎及胃肠道并发症的临床诊断、病情评估及指导有一定帮助。
【关键词】 过敏性紫癜； 基质金属蛋白酶-9
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To investigate the role of serum matrix metalloproteinase-9 in children with henoch-schonlein purpura. Methods The serum concentration of MMP-9 was measured by enzyme-linked immunosorbent assay method in 40 acute SHP patients, 35 recovery patients and 30 healthy controls. Results The serum levels of MMP-9 and C-reactive protein in acute phase were significantly higher than those in healthy controls and those during recovery period(t＝12.30,8.42,6.37,8.13，P < 0.05). The serum level of MMP-9 in the HSP patients dropped back slowly and their levels during recovery period was still higher than those in healthy controls (t＝9.92，P＜0.05). The serum levels of MMP-9 were higher in renal damage and gastrointestinal symptoms groups than those in non-renal damage and non-gastrointestinal symptoms groups (t＝3.75,3.17，P＜0.05), whereas the serum level of CRP had no significant difference between them (t＝0.96,0.56，P＞0.05). The serum level of MMP-9 showed positive correlation with the level of CRP(ｒ=0.68, P＜0.05). Conclusions The damage of extracellularmatrix plays an important role in the pathological mechanism of HSP. The level of MMP-9 may be used as index of the HSP activity and progression as well as the damage of gastrointestinal and renal system in HSP.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ henoch-schonlein purpura; matrix metalloproteinase-9
过敏性紫癜( henoch-schonlein purpura , HSP)是儿童时期最为常见的以小血管炎症为主要病变的变态反应性疾病。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs )在细胞外基质(extracellu-larmatrix, ECM)合成、降解及组织重塑过程中起决定性调节作用，MMPs的损伤是血管炎发生和的关键因素[1，2]。已有报道基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9, MMP-9）与某些自身免疫性血管炎症性疾病(如川崎病、大动脉炎及贝赫切特病等)密切相关[3～5]，提示MMP-9 可能在血管炎发病机制中起重要作用。本次研究检测了40例HSP患儿不同时期血清MMP-9水平，旨在探讨其临床意义。现在报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2005年5月至2007年6月间儿科40例住院确诊HSP患儿，符合张之南主编《血液病诊断及疗效标准》的HSP诊断。其中依据患儿有否并发胃肠道症状(腹痛、便血或大便隐血试验阳性)，分为胃肠道症状组及无胃肠道症状组。依据有否表现为血尿和(或)蛋白尿，分为肾损害组及无肾损害组。HSP急性发作组(发作组)40例，为起病后1个月以内，具有HSP的临床表现。其中男性22例，女性18例，年龄3~12岁，平均年龄(7.61±2.13)岁；选择同期治疗后临床表现全部消失后1个月内患儿35例为HSP临床缓解(缓解组)，其中男性19例，女性16例，年龄(7.79±2.24)岁；对照组：选择30例均来自同期门诊体检的儿童，其中男性17例，女性13例，年龄2~13岁，年龄(7.05±2.63)岁。发作组中出现胃肠道症状组18例，其中男性10例，女性8例，平均年龄(7.35±2.01)岁；无胃肠道症状组22例，其中男性12例，女性10例，平均年龄(7.82±2.33)岁。肾损害组14例，其中男性7例，女性7例，平均年龄(7.25±2.24)岁；无肾损害组26例，其中男性15例，女性11例，平均年龄(7.80±2.41)岁。HSP发作组、缓解组及对照组间的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P均>0.05)；胃肠道症状组与非胃肠道症状组及肾损伤组与非损伤组之间的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P均>0.05)。
1.2 方法 发作组患儿采血前48 h均未应用皮质激素类药物，所有受试者均空腹静脉取血2ml，立即分离血清存放于-20℃冰箱待测。血清MMP-9浓度测定采用双抗体夹心酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法，试剂盒（由上海森雄科技实业有限公司生产），操作根据药盒说明书进行。Array-360特定蛋白分析仪（由美国贝克曼公司生产）测定C-反应蛋白(c-reactive protein, CRP)。监测不同时期的血清MMP-9及CRP。
1.3 统计学方法 数据均用SPSS 10.0统计软件包处理。计量资料采用均数±标准差(x+_s)表示。两样本均数比较用独立样本t检验；用直线相关分析法处理指标间的关系。设P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血清MMP-9及CRP水平在HSP不同时期与对照组比较见表1
由表1可知，与对照组比较，发作组血清MMP-9和CRP及缓解组的MMP-9水平均升高，两者差异均有统计学意义 (t分别＝12.30、8.42、9.92，P均＜0.05)，而缓解组血清CRP水平与对照组的差异无统计学意义( t=1.50，P＞0.05)；与缓解组比较，HSP病儿发作组的血清MMP-9及CRP水平仍高，两者差异均有统计学意义( t分别＝6.37、8.13，P均＜0.05)。
2.2 HSP急性期不同临床表现组间血清MMP-9及CRP水平的比较见表2
由表2可知，HSP急性期并发肾损害组及有胃肠道症状组患儿血清MMP-9水平升高，与相应的无肾损害组及无胃肠道症状组比较，差异均有统计学意义( t分别＝3.75、3.17，P均 ＜0. 05)，而血清CRP水平在有/无胃肠道症状和有/无肾损伤组之间，差异均无统计学意义(t分别＝0.96、0.56，P均＞0.05)。
2.3 血MMP-9与CRP浓度之间相关性分析 对40例急性期患儿血MMP-9与CRP浓度进行相关性分析发现， HSP患儿血清MMP-9水平与CRP浓度之间成直线正相关(ｒ=0.68，P＜0.05 )。
3 讨论
HSP的基本病理改变为较广泛的急性无菌性毛细血管和小动脉的炎性反应，可出现血管壁灶性坏死，纤维素沉积。紫癜性肾炎（henoch-schonlein purpura nephritis, HSPN）目前多认为与免疫复合物及激活的补体沉积于肾小球系膜有关。
MMPs是一组锌离子依赖性的蛋白水解酶，主要作用是降解细胞外基质，Ⅳ型胶原是血管内皮细胞外基质主要成分。MMP-9是降解Ⅳ型胶原最主要的酶，正常情况下很少表达，但在细菌毒素、细胞因子等外源性及内源性因素的刺激下，MMP-9自中性粒细胞大量释放，从而破坏血管基底膜及组织结构，导致组织损伤[1，2，5]。国外的动物试验中已得到证实MMP-9水平的变化可预测细胞外基质的损伤和破坏的程度[6，7]。HSP急性期血中活化的T细胞分泌大量白介素、肿瘤坏死因子-α、表皮生长因子、血小板衍化生长因子、转化生长因子等，均能使MMPs表达上调。因此，机体的炎症反应可促进血管内皮细胞及ECM损伤，两者相互促进，进一步加重血管炎的病理损害。心、脑、肾等血管病变及结缔组织病患者MMP-9明显升高，其在HSP中的变化少见报道。本次研究结果显示，HSP病儿血清MMP-9水平急性期较缓解期和对照组有显著增高（P＜0.05 )，缓解期虽较急性期降低，但仍明显高于对照组（P＜0.05)，提示在HSP发病机制中可能存在细胞外基质的损伤。HSP病儿血清MMP-9增高的机制尚未完全清楚。参与HSP的致炎细胞因子如白介素-1、白介素-6、肿瘤坏死因子-α等均能够促进MMP-9的表达[1～3]。本次研究还显示HSP急性期患儿血CRP也明显升高，且血清MMP-9水平与CRP浓度之间成正相关，CRP与炎症细胞因子如白介素-1、白介素-6、肿瘤坏死因子-α等密切相关，进一步支持MMP-9增高与高水平细胞因子有关。
HSP的基本病理变化是全身毛细血管变态反应性疾病，因肾脏具有丰富的毛细血管极易受累，其肾脏受累程度可作为判定本病预后的重要指标。局灶性和节段性肾小球系膜增生、ECM堆积、新月体形成；肾间质纤维化、胶原Ⅳ表达和血栓形成为该病特征性病理改变。ECM异常积聚是形成肾脏特征性病理改变重要原因[8]。李茜等[9]认为HSP形成机制可能与明胶酶降解Ⅳ型胶原等基底膜重要成分致肾小球结构破坏有关。本次研究结果发现紫癜性肾炎患儿血清MMP-9明显高于无肾脏受累患儿（P<0.05），提示血清MMP-9变化与肾脏病变有一定关系，也表明血清MMP-9有助于诊断疾病和判断预后。本次研究结果还显示，HSP病儿急性期有胃肠道症状组血清MMP-9水平明显高于其他患儿（P<0.05），提示MMP-9与HSP胃肠道功能损害关系密切，其机制可能与胃肠道血管受损后内皮细胞表达MMP-9增高有关。同时本次研究发现HSP急性期血CRP升高（P<0.05），其变化与HSP的肾脏及胃肠道损害的发生无关（P>0.05），缓解期血CRP恢复正常。提示在HSP急性期同时存在炎症活动及细胞外基质的损害，随着病情的恢复炎症活动减弱，而细胞外基质合成与降解失衡仍在继续。MMP-9表达异常致Ⅳ型胶原合成和降解失衡，肾小球基膜损伤，可出现血尿、蛋白尿，推测细胞外基质的损伤可能在HSP发病机制中发挥更大作用。
综上所述，本次研究提示血清MMP-9变化可反映HSP细胞外基质的损伤及毛细血管变态反应性疾病的活动情况，对HSP疾病诊断、监测病情及预后判断和指导均有一定帮助。
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