高效毛细管电泳法同时测定复方鞣酸涂膜剂中四组份含量

【关键词】  水杨酸； 苯甲酸； 电泳，毛细管； 复方鞣酸涂膜剂； 间苯二酚； 苯酚

复方鞣酸涂膜剂是由鞣酸、间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚、聚乙烯醇124、甘油、乙醇等组成的皮肤科外用制剂，可抑制真菌生长、止痒，用于脚癣、甲癣、体癣、股癣及神经性皮炎。原质量标准未列含量测定项［1］。含间苯二酚、苯酚、水杨酸、苯甲酸的复方制剂的含量测定，报道集中在高效液相色谱法（HPLC）法和分光光度法［2~9］。毛细管电泳以其高效、快速、运行成本低廉以及环境友好等优势，在药物分析中得到了广泛应用。为了有效控制复方鞣酸涂膜剂的质量，2005年10月~2006年2月，建立了高效毛细管电泳（HPCE）法同时测定复方鞣酸涂膜剂中间苯二酚、水杨酸、苯甲酸和苯酚含量的方法，操作简便、快速、准确，可用于该制剂的质量控制。

    1  仪器与试剂

    HPCE-10型高效毛细管电泳仪，JS-3050UV色谱工作站(均为大连江申分离技术公司产品)；BS224S型天平(Sartorius)；SYZ-C型石英亚沸高纯水蒸溜器(金坛市晶玻实验仪器厂)；AS2060B型超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；pHS-2型精密酸度计(上海雷磁仪器厂)；未涂层弹性石英毛细管45 cm×75 μm ID，有效长度38 cm (河北永年锐沣色谱器材有限公司)；鞣酸(AR，遵义市第二化工厂)；间苯二酚(AR，湖南南方化工厂试剂公司)；水杨酸(AR，天津市科密欧化学试剂开发中心)；苯甲酸(药用，镇江前化工厂)；苯酚(AR，广东西陇化工厂)；对氨基苯甲酸(AR，上海五联化工厂)；复方鞣酸涂膜剂(本院配制)；其余为药用辅料。水为石英亚沸水。

    2  方法与结果

    2.1  电泳条件及系统适用性试验

    检测波长200 nm，重力进样10 cm×20 s，运行电压12 KV。运行缓冲液为30 mmol/L硼砂溶液(NaOH调至pH 10.0)。实验前，用0.1 mol/L NaOH溶液填充毛细管30 min，再依次用水、0.1 mol/L HCl；水、0.1 mol/L NaOH；水及运行缓冲液冲洗5 min，2次实验之间用运行缓冲液冲洗毛细管5 min。所有溶液使用前均超声脱气并经0.45 μm微孔滤膜过滤。实验在室温进行。在该电泳条件下，样品中间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚及内标对氨基苯甲酸的保留时间分别为7.299、12.241、11.368、5.789、9.662 min，电泳结果见图1。

    2.2  标准曲线与线性范围

    精密称取间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚、对氨基苯甲酸适量，用水溶解，分别配成浓度约为1 000 mg/L的对照溶液。分别精密吸取各对照贮备液0.05、0.1、0.2、0.8、1.2、1.6 ml置10 ml量瓶中，用运行缓冲液定容，进样测定，测量峰面积值。对照品与内标峰面积比值Y与各对照溶液的浓度X(mg/L)之间呈良好的线性关系。回归方程和线性范围：间苯二酚：Y1=0.0126X1+0.003，γ1=0.9990；水杨酸：Y2=0.021X2+0.0465，γ2=0.9976；苯甲酸：Y3=0.0103X3-0.0014，γ3=0.9992；苯酚：Y4=0.0066X4+0.0101，γ4=0.9994。线性范围均为5～160 mg/L。

    2.3  精密度实验

    精密吸取各对照品储备液0.8 ml置10 ml量瓶中，按“2.2”项下操作进行电泳分析。根据测出的四组分含量，求得间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚的日内和日间RSD分别为2.21%、2.94%；1.37%、1.70%；1.48%、1.64%；3.48%、3.92%(n=5)。

    2.4  回收率实验

    按处方比例称取辅料，精密配制含间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚各为标示量80%、100%、120%的模拟样品3份，按“2.5”项下方法测定,计算回收率。结果见表1。

    2.5  样品测定

    称取复方鞣酸涂膜剂1 g，精密称定，置烧杯中，缓慢加入已预热至60 ℃的乙醇适量，置60 ℃水浴搅拌使溶，移入100 ml量瓶，放至室温，加乙醇定容。精密量取1 ml，置于10 ml量瓶中，用运行缓冲液定容。进样测定，结果见表2。表1  回收率测定结果（n=3）表2  样品含量测定结果

　　3  讨论

    3.1  内标物的选择

    为提高定量分析的精密度，采用内标法。内标对氨基苯甲酸在进样溶液中浓度为80 mg/L。

    3.2  运行缓冲液pH值的影响

    考察了30 mmol/L硼砂缓冲液中不同pH值（pH 8.5～11.0）对分离的影响。实验表明pH 9.5～10.5，四组分和内标均能实现基线分离，但是随着pH的增加，缓冲液的运行电流增大，焦耳热增加，于分离不利故选择pH 10.0。

    3.3  运行缓冲液浓度的影响

    考察了10～50 mmol/L硼砂缓冲液（pH 10.0）对分离的影响。实验中发现，随着缓冲液浓度升高，各组分和内标之间的分离度增加，迁移时间延长。这是由于增加离子强度可使毛细管管壁双电层压缩，Zeta电位下降，从而降低了电渗流所致。但同时焦耳热增加，基线不稳。为了兼顾分离度、峰形和分析速度，选择30 mmol/L硼砂缓冲液（pH 10.0）为运行缓冲液。

    3.4  运行电压

    考察了运行电压6～20 kV对迁移时间和分离的影响。在选定的实验条件下均实现基线分离，随着电压增加，迁移时间迅速缩短。当运行电压大于15 kV时，焦耳热明显增加，从而使柱效和分离度下降，噪音增大。因此，选择运行电压为12 kV。

    3.5  与高效液相色谱法比较

    采用HPCE法，不经分离同时测定复方鞣酸涂膜剂中间苯二酚、水杨酸、苯甲酸和苯酚的含量，快速、简便、成本低廉，可用于该制剂的质量控制。

【】
  ［1］中华人民共和国卫生部药政局.制剂规范 ［M］.2版.北京：中国医药科技出版社，1995：111-112.

［2］陈雅,傅若秋.HPLC法测定复方苯甲酸醇溶液的含量［J］.解放军药学学报,2000(6):331-332.

［3］刘道平,金克宁,葛新.高效液相色谱法测定复方苯甲酸软膏中苯甲酸和水杨酸的含量［J］.中国应用药学杂志,2004(3):224-226.

［4］邢蓉,邓子煜,陈根德.高效液相色谱法同时测定止痒酊中三组分的含量［J］.中国医院药学杂志,2005(3):227-229.

［5］余小平.高效液相色谱法同时测定足光散中水杨酸、苯甲酸的含量［J］.药物分析杂志,2005(8):955-957.

［6］张荣桂,马鸿雁.高效液相色谱法同时测定复方水杨酸酊中两种组分含量［J］.中国药业,2006(6):17.

［7］刘群,杨元玉,江雪欣.反相高效液相法同时测定复方雷锁辛擦剂中三组分的含量［J］.中国药师,2006(2):152-153.

［8］叶芝祥,吴咏梅.系数倍率和卡尔曼滤波紫外分光光度法同时测定发洗剂中的苯酚、间苯二酚和水杨酸［J］.化学分析计量,2003(6):18-19.

［9］张群,占峰,开小明.双波长线性回归光度法同时测定苯酚和间苯二酚［J］.光谱学与光谱分析,2006(11):2110-2112.