复方罗布麻片中罗布麻叶提取工艺研究

【摘要】  目的 研究复方罗布麻片中罗布麻叶的提取工艺。方法 以槲皮素含量为指标,以乙醇浓度、乙醇体积和提取时间为考察因素,应用L9(34)正交试验优化罗布麻叶的提取工艺,并用高效液相色谱法测定复方罗布麻片中槲皮素的含量。色谱条件为：Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液(27∶73),检测波长为371 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃。结果 用30倍85%乙醇,在水浴中回流2 h。槲皮素在0.963 0～0.080 3 μg范围内具有良好的线性关系,r＝0.999 8(n＝7),平均回收率为99.46%。结论 本工艺提取完全,并获得了满意的测定结果。

【关键词】  复方罗布麻片；罗布麻叶；槲皮素；提取工艺

   复方罗布麻片是由罗布麻叶、野菊花、防己粉,以及三硅酸镁、盐酸异丙嗪、维生素B1、维生素B6等组成的复方制剂,是临床治疗高血压的常用药物,具有降压平稳、不良反应小、价格便宜等特点,其质量标准收载于《国家药品标准·化学药品》第十一册[1]。现行复方罗布麻片的制备工艺为：取罗布麻叶加水煎煮3次,每次1 h,合并煎煮液,滤过,将滤液浓缩至清膏,干燥,制成干浸膏后与其他药物混合均匀,制成颗粒,干燥,整粒,压片,包衣。用水煎煮罗布麻叶的提取工艺不能充分提取罗布麻叶的有效成分,导致复方罗布麻片的质量和疗效出现不同程度的下降,急需进一步完善复方罗布麻片制备工艺。

　　1  仪器与试药

    DIONEX P680LPG-4型高效液相色谱仪(美国戴安公司), DIONEX 170UV紫外检测器(美国戴安公司),Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),UV-1800SPC型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司),BS-21S型电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司),AEL-160型电子分析天平(日本岛津公司),二孔型电热恒温水浴锅(北京科伟永鑫实验仪器设备厂),YB-1A型真空恒温干燥箱(天津金洲科学仪器有限公司)。乙腈为色谱纯,乙醇、甲醇、盐酸与磷酸为分析纯,水为去离子水。槲皮素对照品(批号100081-200406,含量97.3%, 120 ℃干燥4 h后用)购于中国药品生物制品检定所。复方罗布麻片(山西云鹏制药有限公司,批号20060502；东芝堂药业安徽有限公司,批号06030301；山西亚宝药业集团股份公司,批号060114)为市售品。复方罗布麻片样品(自制,批号070511、070512、070513)。

　　2  方法与结果

　　2.1  紫外检测波长的选择

    用流动相配制槲皮素的标准溶液0.01 mg/mL,在400～300 nm波长范围内扫描,在371 nm处有最大吸收,所以选择371 nm为槲皮素检测波长。

　　2.2  色谱条件

    Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温：30 ℃,进样量：20 μL。根据槲皮素的化学性质,参考有关文献[2-6],按乙睛-0.5%磷酸溶液(27∶73)比例,采用恒压恒流(流速为1.0 mL/min)洗脱方式将其分离。

　　2.3  罗布麻叶的提取工艺优化
   
　　通过查阅相关文献[7]及预试验,以槲皮素含量为指标,以乙醇浓度、乙醇体积和提取时间为考察因素,采用L9(34)正交试验优化槲皮素的提取工艺。取罗布麻叶细粉(过3号筛)约1 g,加B倍A浓度的乙醇,加盐酸9 mL,在水浴中回流C小时,冷却后,转移至250 mL量瓶中,加乙醇至刻度,用微孔滤膜滤过。见表1～表3。表1  试验因素水平（略）表2  正交试验表（略）表3  方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19,F0.01(2,2)=99
   
　　可见,乙醇浓度、加乙醇体积和提取时间对试验结果有显著影响,影响因素的作用主次顺序为B、A、C。通过比较,确定罗布麻叶中槲皮素最佳提取工艺为B2A3C2,即加30倍体积的85%乙醇,在水浴中加热回流2 h。按上述试验确定的最佳提取工艺条件重复3次,结果罗布麻叶中槲皮素提取稳定,平均值为9.171 8 mg/g,说明上述提取工艺适合罗布麻叶中槲皮素的提取。

　　2.4  线性关系考察

    精密称取槲皮素对照品(含量97.3%)20.62 mg,置于100 mL容量瓶中,加85%甲醇温热超声1 h溶解,并稀释至刻度,即得对照品贮备液。分别取上述对照品贮备溶液0.5、1、2、3、4、5、6 mL至25 mL量瓶中,加85%甲醇至刻度,分别进样20 μL。以进样量为横坐标、以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为：Y＝-0.539 8＋60.282 8X,r＝0.999 8(n＝7)。槲皮素进样量在0.963 0～0.080 3 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.5  精密度试验
   
　　精密吸取槲皮素对照品贮备溶液2 mL至25 mL量瓶中,加85%甲醇至刻度,连续进样6次,进样20 μL,槲皮素RSD＝0.08%。

　　2.6  罗布麻叶浸膏含量测定
   
　　精密称取自制复方罗布麻片的罗布麻叶浸膏,置于100 mL圆底烧瓶中,精密加50 mL盐酸甲醇溶液(1→25),称定重量,加热回流2 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。进样20 μL,记录色谱图,结果见表4。表4  浸膏含量测定结果（略）

　　2.7  样品含量测定
   
　　取本品20片,研细,精密称取适量,精密量取盐酸甲醇溶液(1→25)50 mL加入100 mL圆底烧瓶中,称定重量,加热回流2 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,微孔滤膜滤过,进样20 μL,记录色谱图。结果见表5。表5  样品含量测定结果（略）