双氢青蒿素软膏处方筛选及体外渗透性研究

           作者：杜丰,李荣生,王乃婕,邱琳,张蓓,梁秉文,付桂兰,叶祖光

【摘要】  目的 筛选双氢青蒿素(DHA)软膏处方及促渗剂。方法 建立体外经皮渗透试验方法,采用高效液相色谱法对DHA样品的体外透皮速率进行考察,并以DHA累积透过量作体外透皮曲线,与Higuchi方程进行拟合。结果 透皮速率以卡波普水溶性软膏及促渗剂为氮酮的最高,达到27.262 μg/(h·cm2),Higuchi方程线性较好。结论 最佳处方为卡波普水溶性基质的DHA软膏处方,最佳促渗剂为氮酮。

【关键词】  双氢青蒿素；软膏；体外透皮试验；促渗剂；高效液相色谱法

    Key words：Dihydroartemisinin；ointment；transdermal experiment in vitro；penetration enhancers；HPLC
 
    双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)为青蒿素的还原产物,是青蒿琥酯、蒿甲醚等药物起抗疟作用的中间产物[1],对疟原虫有强大且快速的杀灭作用,能迅速控制临床发作及症状。本试验通过体外透皮试验方法筛选DHA软膏处方及不同促渗剂对DHA软膏的渗透性进行研究,为DHA经皮给药系统(transdermal drug delivery system,TDDS)制剂的研究提供参考。

　　1  实验材料

　　1.1  药品与试剂

    双氢青蒿素对照品(批号100184-200401,中国药品生物制品检定所提供),双氢青蒿素原料药(批号20050704,购自重庆华立武陵山制药有限公司)。水为高纯水,甲醇及乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

　　1.2  动物

    Wistar大鼠,体重200 g左右,购自中国医学科学院实验动物研究所,动物合格证号：SCXK(京)2005－0013。

　　1.3  仪器

    高效液相色谱仪(Waters2695,美国),检测器(Waters2996,美国),透皮扩散试验仪(TK-12A型,上海锴凯科技贸易有限公

　　2  方法与结果

　　2.1  体外透皮试验方法学考察

　　2.1.1  色谱条件[2] 

　　Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-水(60∶40)；流速：1 mL/min；检测波长：216 nm；柱温：25 ℃。在该色谱条件下DHA与其他成分能达到基线分离,阴性对照无干扰,见图1。

　　2.1.2  对照品溶液的配制 

　　精密称定DHA对照品10.13 mg,置10 mL量瓶中,加适量甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品贮备液(1.013 mg/mL)。

　　2.1.3  供试品溶液的制备 

　　取DHA样品涂于已处理好的大鼠皮肤上,做体外透皮试验,接受液经0.45 μm微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。

　　2.1.4  阴性对照溶液的制备 

　　取不含DHA的阴性对照样品,按“2.1.3”项下方法操作,即得阴性对照溶液。

　　2.1.5  标准曲线的建立 

　　精密吸取对照品贮备液,用接受液定容,配制一系列不同浓度的溶液(0.025 325、0.050 65、0.101 3、0.202 6、0.405 2、0.759 75、1.013 mg/mL)。精密吸取上述溶液各10 μL,分别注入液相色谱仪,记录峰面积。以DHA峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝311 707.799 4X－1 355.167 2,r＝0.999 9。结果表明,DHA在0.253 25～10.13 μg范围内线性关系良好。
　
　　2.1.6  精密度试验 

　　取供试品溶液,重复进样6次,以DHA含量计算,RSD＝0.64%。

　　2.1.7  稳定性试验 

　　取供试品溶液,分别于0、4、8、12、16、20、24、48、56 h进样10 μL,测定,以DHA含量计算,RSD＝0.95%。样品在取样后2 d内完成含量测定,保证样品的稳定性。

　　2.1.8  回收率试验 

　　取阴性对照溶液,按一定比例加入DHA对照品溶液(1.013 mg/mL),配制成浓度为0.050 65、0.202 6、0.506 5 mg/mL的溶液,以DHA含量计算,求得平均回收率为98.67%(n＝9),RSD＝2.04%。