复方鳖甲软肝片抑制大鼠酒精性肝纤维化作用机制研究

　　4  结果

　　4.1  用药前后大鼠血清中透明质酸、IV型胶原及层粘连蛋白检测结果

　(见表1、表2)表1  用药前2组大鼠血清中HA、LN和CⅣ含量比较(略)注：与正常组比较,*P＜0.05表2  用药后各组大鼠血清中HA、LN和CIV含量比较(略)注：与正常组比较,**P＜0.01；与模型组比较,▲▲P＜0.01

　　4.2  大鼠肝组织转化生长因子-β1蛋白表达免疫组化染色结果

    本实验采用免疫组织化学染色方法检测了正常组、模型组、中药组及西药组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白的表达情况,结果显示,正常组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白仅有少数散在肝细胞阳性表达；模型组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白肝细胞弥漫强阳性表达；中药组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白部分肝细胞阳性表达；西药组中央静脉周围及肝小叶内较多肝细胞阳性表达。大鼠TGF-β1肝组织免疫组化染色结果初步显示,复方鳖甲软肝片和安珐特均能显著下调大鼠肝组织中TGF-β1蛋白含量,且复方鳖甲软肝片优于安珐特。结果见图1。

　　4.3  大鼠肝组织石蜡切片Mallory染色光镜观察结果

    肝组织中的胶原经Mallory染色,光镜下呈蓝色。正常组大鼠肝组织中仅有少量胶原表达,肝细胞及汇管区、中央静脉及窦周围几乎不见胶原纤维；模型组大鼠肝组织内胶原水平显著提高,中央静脉及汇管区轻度纤维化；中药组及西药组大鼠肝血窦周围胶原明显减少,相邻血窦间的纤维联络基本消失。Mallory染色初步表明,复方鳖甲软肝片在降低肝组织胶原含量上疗效接近安珐特。

　　5  讨论

    目前,肝纤维化的血清标志物主要有HA、LN、CⅣ。HA是一种广泛存在于细胞外基质(ECM)中的高分子多糖,肝纤维化时肝星状细胞(HSC)合成HA增加,而肝内皮细胞对HA降解能力下降,导致血清中HA水平明显增高,其增高程度与肝组织炎症和纤维化程度呈正相关,可作为抗肝纤维化药物治疗动态观察指标。LN是一种糖蛋白,主要存在于基底膜,反映基底膜的更新率。LN在肝组织中含量甚微,当肝窦毛细血管化和汇管区纤维化时,星状细胞大量分泌LN和CⅣ,随着肝纤维化进展而合成增加,血清中LN明显增高。CⅣ在肝内合成和代谢,在肝纤维化发展过程中,肝组织CIV过量合成,出现肝窦毛细血管化,使血液中CⅣ异常增加,可能是最早增生的纤维,CⅣ被认为是反映胶原蛋白生成出现最早的重要指标。LN及CⅣ是血管胆管基底膜骨架的主要胶原成分,肝窦内无明显沉着[2-3]。

    近年来研究发现,在众多细胞因子中,TGF-β1是最为重要的致纤维化因子。TGF-β1对肝纤维化发生具有特别重要的病理生理学意义。TGF-β1产生时均以非活性状态存在,与相应受体无结合活性。肝受损时,肝内的炎细胞、星状细胞(HSC)、枯否细胞等自分泌或旁分泌非活性TGF-β1 ,非活性TGF-β1被炎症环境中的各种酶和细胞因子激活,刺激上述细胞进一步产生TGF-β1,形成逐级放大效应,导致TGF-β1大量生成和激活。TGF-β1在肝纤维化中的作用具体表现在：①TGF-β1启动和维持肝HSC的活化,促进其增殖；②促进HSC等细胞合成ECM；③抑制基质金属蛋白酶(MMPs)的产生,促进金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)的产生,以阻碍胶原的降解[4-6]。

    本实验结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肝脏组织HA、TGF-β1蛋白表达和CⅣ表达显著增强,提示HA和TGF-β1参与肝纤维化的发生发展,进一步证实TGF-β1在肝纤维化过程中起重要作用；中药组的肝纤维化程度较模型组减轻,肝组织HA、TGF-β1蛋白表达和CⅣ表达亦显著减弱,提示抑制纤维化肝组织HA、TGF-β1蛋白表达可能是复方鳖甲软肝片的抗肝纤维化的作用靶点之一。复方鳖甲软肝片可能通过下调TGF-β1表达,抑制胶原的合成和降解,从而达到逆转纤维化的目的。

【参考文献】
  　　[1] 李 健,牛建昭,曾 艳,等.复方鳖甲软肝片对酒精性肝纤维化狄氏间隙胶原沉积的影响[J].解放军医学杂志,2004,29(7)：567－570.

　　[2] 李 琴,王宝恩,丛玉隆,等.凝血指标在判断肝硬化患者病变严重程度中的价值[J].中华内科杂志,2005,44(3)：188－190.

　　[3] 冯新利,徐贵平,欧阳艳.肝纤维化血清诊断方法研究进展[J].放射免疫学杂志,2003,16(2)：111－117.

　　[4] 吴 强,宋少刚,杨 枫,等.大鼠肝纤维化中PDGF和TGF-β1的动态改变[J].安徽医科大学学报,2003,38(5)：340－342.

　　[5] Gutierrez-Ruiz MC, Gomez-Quiroz LE. Liver fibrosis：searching for cell model answers[J]. Liver Int,2007,27：434－439.

　　[6] Moreira RK. Hepatic stellate cells and liver fibrosis[J]. Arch Pathol Lab Med,2007,131：1728－1734.