复方鳖甲软肝片抑制大鼠酒精性肝纤维化作用机制研究

来源:岁月联盟 作者: 时间:2015-06-05

               作者:李丰衣,孙劲晖,田德禄,祝世功,潘慧,刘霞,王庆宝  

【摘要】  目的 探讨复方鳖甲软肝片对实验性大鼠酒精性肝纤维化的抑制作用及机制。方法 40只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、中药(复方鳖甲软肝片)治疗组和西药(安珐特)治疗组,以“酒精-吡唑-玉米油”混合液灌胃并饲以高脂饮食16周制备大鼠酒精性肝纤维化模型,给药4周后检测肝纤维化指标、肝组织病理学及肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达变化。结果 酒精性肝纤维化模型大鼠肝功能显著异常,肝纤维化明显;经4周治疗,与模型组比较,中药组及西药组血清中透明质酸(HA)含量显著下降(P<0.01),且中药组能显著下调大鼠肝组织中TGF-β1蛋白含量。结论 复方鳖甲软肝片能够有效阻止和逆转酒精性肝纤维化的进程。

【关键词】  复方鳖甲软肝片;酒精性肝纤维化;转化生长因子-β1;大鼠

    Abstract:Objective To probe into the inhibiting action of Compound Biejiarangan Troche on alcohol hepatic fibrosis in rats. Methods Forty Wistar male rats were divided into control, model, Compound Biejiarangan Troche and Anfate treatment groups. Alcohol hepatic fibrosis model was established by intragastrical perfusion with mixture of “alcohol-Pyrazole-coil oil” and high-fat diet for sixteen weeks. After four weeks’ intervention, changes of hepatic fibrosis index, liver tissue pathology and expression of TGF-β1 in liver tissue were observed. Results The hepatic function of model rats were changed and abnormal, with obvious fibrosis in hepatic histopathology. After intervention for four weeks, HA decreased (P<0.01) in serum of Compound Biejiarangan Troche group and Anfate group compared with that of model group, and expression of TGF-β1 decreased in Compound Biejiarangan Troche group compared with Anfate group. Conclusion Compound Biejiarangan Troche has effect of inhibiting and reversing alcohol hepatic fibrosis in rats.
   
  Key words:Compound Biejiaruangan Troche;alcohol hepatic fibrosis;TGF-β1;rat
 
    本实验采用“白酒-吡唑-玉米油”混合液灌胃法复制动物模型,观察复方鳖甲软肝片的抗纤维化作用,并探讨其对转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响及抗酒精性肝纤维化作用机制。

  1  实验材料

  1.1  动物

    清洁级雄性Wistar大鼠40只,体重(200±10)g,购于北京维通利华公司,许可证号:SCXK2004~2005。

  1.2  主要药物及试剂

    复方鳖甲软肝片由鳖甲、赤芍、冬虫夏草、三七、紫河车、连翘、当归、莪术、党参、黄芪和板蓝根组成,内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司生产,批号20020501,用前以生理盐水溶解;安珐特,黑龙江卫世医药有限公司生产,国药准字:H23023289。透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)及层粘连蛋白(LN)放免试剂盒购自北京北方生物技术研究所。TGF-β1兔抗多克隆抗体(Santa Cruz),辣根酶标记的羊抗兔二抗,DAB显色系统,均购自北京中山生物技术公司。

  2  实验方法

  2.1  分组及造模

    将大鼠随机分成正常组、模型组、中药组和西药组,每组10只。模型组、中药组、西药组采用“白酒-吡唑-植物油”混合液灌胃法复制动物模型[1],每只大鼠灌胃白酒4.8 g/(kg·d)、吡唑24 mg/(kg·d)、玉米油2 mL/(kg·d)的混合液,灌胃16周。在灌胃白酒混合物的同时饲喂高脂饲料(基础饲料-胆固醇-猪大油=79∶1∶20)。正常组每日用生理盐水灌胃,普通饲料喂养。

  2.2  给药

    中药组灌胃鳖甲软肝片,给药量0.54 g/(kg·d),西药组灌胃安珐特,给药量21.6 mg/(kg·d),2组均相当于人临床用量的5.4倍,均治疗4周。正常组及模型组每日灌胃2 mL生理盐水。

  2.3  观测指标

    造模16周后,正常组和模型组大鼠尾静脉采血,分离血清,用放免分析法测定血清中HA、LN及CⅣ含量。治疗4周后,正常组、模型组、中药组和西药组大鼠尾静脉采血,分离血清,测定血清中HA、LN及CⅣ含量。治疗4周后,取各组大鼠肝组织,常规石蜡包埋、切片、HE染色、光镜观察,TGF-β1免疫组化染色实验也采用该套石蜡块。

  3  统计学方法

    应用SPSS13.0软件包进行统计分析。计量资料用x±s表示,2组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,各组间两两比较采用LSD检验。

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