羊肚菌多糖提取分离条件的研究

　　2  结果

　　2.1  粗多糖重量比较

　　(见表1)表1  粗多糖重量比较（略）

    从粗多糖重量比较上分析,与单纯热水浸提相比,超声及酶法均可明显提高粗多糖得率。

　　2.2  苯酚-硫酸法检测多糖含量及制作标准曲线

    根据苯酚-硫酸法检测结果制作标准曲线,多糖含量与吸光度A490之间的关系满足方程Y＝0.007 1X－0.045 5,其中X为A490,Y为溶液中多糖含量。

　　2.3  粗多糖中总糖含量检测

    测得羊肚菌多糖的A490值,对照标准曲线方程Y＝0.007 1X－0.045 5计算所得的总糖含量。结果见表2、表3。表2  黑脉羊肚菌GIM5.29的多糖得率（略）表3  羊肚菌GIM5.69的多糖得率（略）

　　在以往对多糖提取方法的优化研究中,通常以最终粗多糖得率来衡量提取技术优劣,如武氏等[6]对羊肚菌多糖提取方法优化后所得粗多糖得率为2.58%。该衡量标准较直观快捷,但因粗多糖中仍存在一定杂质,故结果可能有一定误差。本研究在统计粗多糖重量基础上进一步采用苯酚-硫酸法精确测量粗多糖中总糖含量,从糖得率上看数值较低,但结果更为精确。试验结果表明,超声和酶法处理均可显著提高多糖得率,且两类菌种多糖得率也有明显差异。提取方法以超声10 min,超声频率为40 kHz,在90 ℃下,恒温加热150 min,浸提2次,多糖的得率最高。两种菌种之中,以GIM5.69型菌种多糖得率较高。

　　2.4  多糖性质测定

    羊肚菌多糖溶于水,不溶于丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等有机溶剂。与I2-KI反应不显示蓝色,说明其为非淀粉类多糖。与斐林试剂反应及FeCl3反应为阴性,说明不含单糖和多酚类物质；Molish反应为阳性,说明是典型的糖类物质；CTAB反应和硫酸-咔唑反应阳性,说明含有糖醛酸。对羊肚菌多糖在190～390 nm扫描发现,其对核酸(260 nm)和蛋白质(280 nm)无明显吸收峰[7],可知该多糖样品中不含游离核酸及蛋白等杂质。

　　3  讨论

    对于两类羊肚菌胞外多糖提取试验发现,相对于传统的单纯以热水浸提的方式,超声处理和纤维素酶、果胶酶处理提取均可明显增加多糖提取量,其中以超声处理方式对多糖提取量增加更为明显。超声处理主要是利用超声波空化产生的极大压力造成羊肚菌细胞壁及整个生物体破裂,且整个破裂过程在瞬间完成；同时超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散及溶解,加速菌丝体中多糖的溶出,故而能很好地提高多糖的得率。同时超声处理具有高效、节能、省时的特点,在工业生产中有较大利用价值。在超声时间的比较中,超声处理10 min对多糖得率的增加最为显著,这可能是因为长时间的超声波放射促使了羊肚菌多糖的分解,从而降低了提取率,这在以往的报道中同样存在先例：一种具有β-1,3-D-葡萄糖结构的多糖在经过长时间的超声处理后,分子量从25万降至5万左右[8]。

    同时,在对两类羊肚菌多糖的比较中发现,GIM5.69型羊肚菌多糖的提取率明显高于GIM5.29型羊肚菌,显示不同类型的羊肚菌在多糖产量上存在明显差异,这一结果对工业应用也有一定指导意义。

【参考文献】
  　[1] 宗 凯,杜 光.食(药)用羊肚菌研究现状[J].中国药师,2006,9(5)：460－462.

　　[2] 孙玉军,陈 彦,周正义,等.羊肚菌胞内多糖对小鼠急性肝损伤的影响[J].中国食用菌,2008,27(2)：41－41,45.

　　[3] 贾建会,吕晓莲,樊利青,等.深层发酵羊肚菌多糖的提取、分离及纯化研究[J].食品科学,2002,23(4)：59－63.

　　[4] 李 洁,邱德江.酶法提取羊肚菌多糖的研究简报[J].河北林业科技, 2005,2(1)：29－32.

　　[5] 孔庆胜,蒋 滞.南瓜多糖的组成及摩尔比测定[J].中国现代应用药学杂志,2000,17(2)：138－140.

　　[6] 武秋立,安家彦.羊肚菌多糖提取、分离条件的选择[J].食品科学,2005, 26(1)：116－120.

　　[7] 吴 彦,周守标,万 安.石蒜属植物多糖的分离纯化[J].生物学杂志, 2005,22(3)：44－45.

　　[8] Stahmann KP, Monschau N, Sahm H, et al. Structure properties of native and sonicated cinerean, aβ-(1-3)-(1-6)-D-glucan produced by Botrytiscinerea[J]. Carbohydr Res,1995,226(1)：115－128.